免疫荧光技术immunofluorescence technique,IFT

系应用荧光素标记的已知抗体或抗原检测待检组织、细胞或体液标本中的相应抗原或抗体的一种免疫检查方法。此法已被广泛应用于基础医学和临床医学的很多领域中。

免疫荧光技术

免疫荧光技术是一种标记免疫技术，是将抗体标记上荧光色素，与相应抗原结合后，用荧光显微镜观察的一种特异性免疫学方法。荧光色素是一种染料，在紫外线或蓝紫光的照射下，能吸收光量子而被激化，放出波长比激发光波为长的荧光。最常用的荧光色素是异硫氰酸荧光素(FITC)和丽丝胺若丹明(RB-200)。根据抗原抗体反应的不同，免疫荧光技术基本上可分为两大类：
❶直接免疫荧光技术： 用荧光素标记的特异性抗体直接与相应抗原结合，以查出未知抗原的方法。
❷间接免疫荧光技术：将未标记的抗体与相应抗原结合后，再加荧光素标记的抗抗体，形成抗原-抗体-荧光抗抗体复合物，用以检查未知的抗原或抗体。由于间接法是用标记的抗球蛋白抗体，能与所有种属特异性相同的相应的抗体结合，检查各种未知抗原或抗体，故较直接法更方便。此外，敏感性也较直接法为高。
免疫荧光技术可以比较准确、快速、敏感地测出少量抗原、抗体以及抗原抗体复合物在细胞内或组织内的定位及分布，已在免疫学、细菌学、超敏感性、肿瘤学等基础理论研究以及临床诊断方面，日益发挥重要的作用。

免疫荧光技术示意图
上图为直接免疫荧光技术，是将荧光染料标记在抗体上与抗原结合。
下图为间接免疫荧光技术，是标记抗抗体，再与抗原抗体复合物进行结合。

荧光抗补体抗体技术 间接免疫荧光技术的一种变型。利用补体能与免疫复合物相结合的原理，以荧光素标记抗补体抗体，鉴定未知抗原或抗体。先将未标记抗体和补体加到抗原上，一定时间后水洗，接着加上荧光素标记的抗补体抗体。抗原抗体对应，则补体被抗原抗体复合物所固定，标记抗补体抗体即可与补体发生特异性反应而被结合于抗原抗体补体复合物上，形成抗原抗体补体和荧光抗补体抗体的大分子复合物，在荧光显微镜下可见阳性荧光现象。补体通常用豚鼠新鲜血清提取。此法较间接免疫荧光技术更敏感，而且不受抗血清来源的动物限制。一种补体-抗补体系统，可检查多种动物的能固定补体的抗体，这是因为补体可被任何哺乳类动物的抗原抗体系统所固定的缘故。此法可用于检查组织内补体的沉积和免疫复合物，以及能固定补体的抗体，以诊断免疫复合物病及自身免疫病。

荧光抗补体抗体法示意图
抗原、抗体和补体形成复合物，用荧光染料标记抗补体抗体，使其与抗原抗体补体复合物中的补体结合。

免疫荧光技术

immunofluorescence technique