Sanger双脱氧链终止法Sanger dideoxy chain termination

是DNA序列测定的主要方法。以单链或双链DNA为模板在DNA聚合酶的催化下采用DNA引物引导新生的DNA的合成，因此又称引物合成法^*或酶促引物合成法。首先将引物复性结合到单链模板上，然后将反应混合物分为4份，再添加4种不同的单脱氧核苷三磷酸(dNTP)和一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)，这样每个试管中仅有一种不同的ddNTP。Klenow酶^*可把一个ddNTP随机加到新合成的DNA链上，由于双脱氧核苷三磷酸缺乏3′-羟基，从而阻止了单脱氧核苷三磷酸的继续加入，终止DNA链的延伸。由于ddNTP可随机地结合到新合成的DNA链上，结果产生一组不同长度的一个共同末端和共同引物的片段。每一反应的dNTP中有一个是核素标记的，当四种反应混合物经聚丙稀酰胺凝胶电泳后，根据电泳图谱可以直接读出DNA顺序。该法是Sanger于1977年建立的，故称为Sanger双脱氧链终止法。