DNA十字印迹法DNA cross blot
是1985年提出的组建DNA物理图谱的新方法,优点是迅速简便,富于特色。大致步骤是:
❶制备DNA样品;
❷限制酶消化和标记;
❸凝胶电泳及其DNA带转移;
❹十字法杂交分析结果。操作注意事项是:
❶不能用缺口转移法*制备热消化物的放射性探针,而是用末端标记法*对3′或5′ 末端进行标记,避免DNA探针*被切成小的片段。
❷热、冷消化物应分别进行电泳及片段分离。
❸制备冷消化物的限制酶在样品DNA上的限制位点应少于制备热消化片段的酶切位点数。
❹将热、冷凝胶上的DNA片段分别转移到基因膜和基因正膜上,然后两膜按电泳方向垂直重合,用吸水滤纸夹在两玻璃板之间进行杂交,放射自显影后,进行结果分析。参见“DNA十字限制图谱系统”。