脱氢乙酸

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化学名称：3－乙酰基－6－甲基－脱(2)氢吡喃－2，4－脱(3)氢二酮

结构式：

分子式：C₈H₈O₄

相对分子质量：168．1

一、脱氢乙酸的鉴别

1．试剂和溶液

1．1 25%氢氧化钠溶液。

1．2 水杨酸乙醇溶液(1+5)。

1．3 14%酒石酸钾钠溶液。

1．4 乙酸铜 取乙酸铜13．3g，加30%乙酸5mL，加水至195mL。

2．操作步骤

2．1 乙酰基试验 取本品0．5g，加入25%氢氧化钠2mL，水杨酸乙醇液3滴，在水浴上加热后呈红色反应。

2．2 铜盐试验 取本品1%溶液5mL，加入10%酒石酸钾钠3滴，乙酸铜3滴，振荡后有紫白色沉淀形成。

二、脱氢乙酸的含量测定

1．试剂和溶液

1．1 95%乙醇。

1．2 酚酞－1%乙醇溶液。

1．3 氢氧化钠 0．1mol／LNaOH标准溶液，按GB601中0．1mol／LNaOH标准溶液配制方法配制和标定。

2．操作步骤

精确称取本品约0．5g，加95%中性乙醇30mL溶解，加3滴酚酞指示液，用0．1mol／LNaOH滴定至反应终点。按以下计算式换算：

每毫升0．1mol／L NaOH溶液相当于16．82mα脱氢乙酸

三、食品中脱氢乙酸的测定

(一)气相色谱法

本方法适用果汁、腐乳、酱菜、酱油中脱氢乙酸含量测定，并能同时测定山梨酸、苯甲酸。

1．原理

样品酸化后，脱氢乙酸用乙醚提取浓缩，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。

2．试剂和溶液

2．1 乙醚 重蒸。

2．2 丙酮 重蒸。

2．3 无水硫酸钠。

2．4 饱和氯化钠溶液。

2．5 10g／L碳酸氢钠溶液。

2．6 1．8mol／L硫酸溶液。

2．7 脱氢乙酸标准溶液 精密称取脱氢乙酸标准品50mg，加丙酮溶解后转入50mL容量瓶中，用丙酮定容。用丙酮分别稀释至每毫升相当于100μg，200μg，300μg，400μg，500μg，800μg脱氢乙酸。

3．仪器

3．1 气相色谱仪。

3．2 K-D浓缩器。

4．测定方法

4．1 样品提取。

4．1．1 果汁：称取20g事先均匀化的样品于250mL分液漏斗中，加10mL饱和氯化钠溶液，1mL硫酸溶液酸化，摇匀。分别以50mL，30mL，30mL乙醚提取3次，每次振摇2min，弃去水层，合并乙醚层于另一250mL分液漏斗中，以10mL饱和氯化钠溶液洗涤一次，弃去水层。用滤纸去除漏斗颈部水分，塞上脱脂棉，加10g无水硫酸钠，室温放置30min，在K—D浓缩器上浓缩至近干，用吹氮去除残留溶剂，用丙酮定容后供色谱测定。

4．1．2 腐乳、酱菜：称取5g事先均匀化的样本于100mL具塞试管中，加10mL饱和氯化钠溶液，用硫酸溶液调节成酸性，用50mL，30mL，30mL乙醚提取3次，每次振摇2min，用吸管转移乙醚层于250mL分液漏斗中，用10mL饱和氯化钠溶液洗涤1次，弃去水层，用50mL，50mL碳酸氢钠溶液提取2次，每次2min，水层转至另一分液漏斗，用酸调节成酸性，加入氯化钠至饱和，用50mL，30mL，30mL乙醚提取3次，合并乙醚层于另一分液漏斗中，用滤纸除去漏斗颈部水分，塞上脱脂棉，加10g无水硫酸钠，室温下放置30min，在K—D浓缩器上以50℃水浴浓缩至近干，用吹氮除去残留溶剂，用丙酮定容后供色谱测定。

4．2 色谱条件柱：玻璃柱，内径3mm，长2．0m，内涂5%DEGS+1%磷酸，固定液的60～80目Chromosorb W AW DMCS。柱温165℃，进样口、检测器温度220℃。

载气：氮气流速40mL／min；氢气流速50mL／min；空气流速500mL／min。

4．3 测定 进样2μL标准系列中各浓度标准使用液于色谱仪中，测定不同浓度脱氢乙酸的峰高，以浓度为横坐标，峰高为纵坐标绘制标准曲线，同时进样2μL样品溶液，测定峰高与标准曲线比较定量。

5．分析结果的表述

式中 x——样品中脱氢乙酸含量，g／kg

ρ——待测样品中脱氢乙酸含量，μg／mL

V——样品制备液体积，mL

m——样品质量，g

6．说明

本方法最低检出量果汁为0．002g／kg，腐乳、酱菜0．008g／kg。果汁回收率87．6%～98．6%(20～200mg／kg)，相对标准偏差为1．91%～4．76%，腐乳回收率90%～95%(20～200mg／kg)，相对标准偏差为2．35%～8．80%，酱菜回收率为87．5%～96．2%(20～200mg／kg)，相对标准偏差为1．29%～3．35%。

腐乳易乳化，提取时不能剧烈振摇，如产生乳化回收率偏低。腐乳、酱菜杂质较多，经碳酸氢钠处理后除去大部分杂质。经无水硫酸钠脱水浓缩后的乙醚液不应有水，否则影响回收率。

图10－8 脱氢乙酸标准色谱图

1－山梨酸 2－脱氢乙酸 3－苯甲酸

(二)高效液相色谱法

本法介绍人造奶油中脱氢乙酸的测定，也可测定其他样品中的脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸。

1．原理

样品中脱氢乙酸加热溶解后，离心分离，经过滤后直接进液相色谱仪中分离测定，与标准品比较定量。

2．试剂和溶液

2．1 甲醇。

2．2 0．03mol／L乙酸钠，乙酸缓冲溶液(pH4．8) 取0．2mol／L乙酸钠溶液88．5mL和0．2mol／L乙酸溶液61．5mL，放入1000mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。

2．3 脱氢乙酸标准溶液 称取0．1000g脱氢乙酸，加4g／L氢氧化钠溶液6mL溶解后，加水至100mL。取该液8mL，加水至1000mL，此液每毫升相当于8μg脱氢乙酸。

2．4 4g／L氢氧化钠溶液。

3．仪器

3．1 液相色谱仪、紫外检测器。

3．2 离心机。

4．测定方法

4．1 样品提取 称取1g样品(入造奶油)，放入带塞刻度离心管中，加水40mL，加温使试样溶解，强烈振摇，加水50mL，混匀，在离心机上约3000r／min，离心5min，取一部分水层用滤纸过滤，取滤液40mL，用滤膜(0．45μm)过滤，供色谱测定用。

4．2 色谱条件 柱：Unisil Q C₁₈4．8mm×50mm，粒径5μm，流动相0．03mol／L乙酸钠乙酸缓冲液+甲醇溶液(7+3)，流速0．8mL／min，检测波长225nm，灵敏度0．02AUFS。

4．3 测定 进样100μL样品溶液，测定其峰高，与预先制备的标准曲线比较定量。

图10－9 脱氢乙酸液相色谱图

BA－苯甲酸 SOA－山梨酸 DHA－脱氢乙酸

5．说明

本方法脱氢乙酸检出限为1．0mg／kg，平均回收率为97．4%，相对标准差为1．66%