羊蓝舌病琼脂扩散试验操作技术

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1．琼脂糖凝胶板的制备。琼脂糖0．9克，加入100毫升生理盐水，硫柳汞0．001克防腐(现配现用可不加)，隔水煮沸，待琼脂充分融化，并摇动均匀后，倒入6厘米直径的平皿，每平皿约7毫升，厚度约4毫米，凝固后置4℃冰箱待用。

2．打孔。用4毫米金属打孔器按7孔图型打孔，中央一孔，周围6孔，呈等边六角形，中央孔至外周孔距3．5毫米。

3．加样。中央孔加标准病毒抗原，外周孔加被检血清和阳性参考血清。不论抗原还是血清，均以加满各孔为度。检测时各批待检血清均应设阳性血清对照。

琼脂板加完抗原抗体后盖好置湿布盒内，一般放22－25℃室温中，亦可放入37℃温箱内。

4．结果判定。在24、48、72、96小时进行结果观察并记录。

(1)凡待检血清孔与抗原孔间出现清晰的沉淀线者为阳性。无沉淀线出现者判为阴性。在待检血清孔与抗原孔间出现微弱沉淀线，为弱阳性反应，必须加阳性对照血清重检。

(2)凡两侧阳性对照血清孔沉淀线均向待检血清孔方向弯曲者，判为弱阳性。两侧对照血清孔与抗原孔间的沉淀线直达待检血清孔边而不弯曲者判为阴性。

(3)凡血清与抗原孔间出现数条沉淀线，或标准阳性血清孔与待检血清孔间两条沉淀线不相连以及待检血清孔与邻近血清孔之间形成沉淀线均属非特异反应。