磷的测定(钼蓝比色法)

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磷具有重要营养学意义，测定方法一般采用钼蓝比色法。样品中的磷酸盐与酸性钼酸铵作用，生成淡黄色的磷钼酸盐，遇氯化亚锡生成亮蓝色的结合物——钼蓝。根据颜色深浅可以进行比色测定。

试剂

(1)钼酸铵溶液：称取25克钼酸铵〔(NH₄)₆·M_o7O₂₄·4H₂O〕，溶于15毫升水中，另将28毫升浓硫酸加到48毫升水中，冷却后两液合并以水稀释至100毫升。

(2)2．5%氯化亚锡甘油溶液：称取2．5克氯化亚锡〔Sncl₂·2H₂O〕，溶于100毫升甘油中，在热温水浴上促使其溶解，混匀后，贮于瓶中。

(3)磷酸盐标准溶液：称取0．7165克磷酸二氢钾(KH₂PO₄)溶于水中，移入1000毫升容量瓶中，并用水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于500微克磷酸盐。吸取10．0毫升此溶液，置500毫升容量瓶中，加水至刻度，此溶液每毫升相当于10微克磷酸盐()。

操作步骤

1．样品处理：同钙测定中样品处理。

2．标准曲线的绘制：分别吸取磷酸盐标准溶液(10微克／毫升)，0．0、0．2，0．4，0．6，0．8，1．0毫升，分别置于50毫升比色管中，各加入20毫升水，2．0毫升钼酸铵溶液，0．25毫升氯化亚锡甘油溶液，然后用水稀释至刻度，混匀。在20分钟内用分光光度计于690nm波长处，测定其光密度。

以光密度为纵坐标，磷酸盐含量为横坐标，绘制标准曲线。

3．样品测定：吸取样液1～5毫升，置50毫升比色管中，加入20毫升水，以下操作同标准曲线绘制。测定其光密度。

4．计算：

式中：A：标准曲线并计算每毫升样品液含磷酸盐量(微克)；

C：样品液总体积(毫升)；

W：样品重(克)；

1000：换算微克为毫克；

100：换算百分含量。