二、应用免疫组化法应注意的几个问题

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(1)每批染色都必须以特异性的阳性和阴性对照为基础，没有对照的结果是不可信的。

(2)阳性表达必须在细胞和组织的特定抗原部位，不在抗原特定部位上的阳性表达不能作为阳性看待。

(3)阴性结果不能视为抗原不表达，但当表达时哪怕只有个别细胞阳性，也要作为阳性看待。

(4)抗体失活、浓度不当或灵敏度不够时，标本处理操作步骤不当使抗原丢失或减弱时，均可产生假阴性。而抗体与多种抗原有交叉反应或与组织中某些成分非特异性结合，内源性酶显色，病变中有其他组织残留，抗原弥散或被瘤细胞吞噬而出现在不该出现的部位，异位抗原的表达和抗原的例外表达，均可产生假阳性。

(5)目前还发现一些肿瘤和正常组织细胞存在着抗原的联合表达，即一种细胞表达多种抗原。这样就需要用一组抗体去检查才能作出判断。因此，熟悉各种组织和肿瘤在抗原上的联合表达是免疫组化诊断的前提。

(6)为使免疫组化诊断更为可靠，正确的方法是应以HE切片为基础，选择正面支持的抗体，还有选用反面否定的抗体，同时获得正反两方面的证据，才能真正发挥免疫组化的诊断优势。如对于黑色素瘤的诊断来说，仅有HMB45阳性还不够，还要有角蛋白(keratin)、LCA的阴性结果，如果可能还要有突触素(synaptophysin，Syn)和结蛋白(desmin)或肌动蛋白(actin)的阴性结果，诊断才能放心，而黑素瘤的阳性抗体除HMB45外，还可以呈现S-100、波形蛋白(vimentin)、NSE、CD15、嗜铬粒蛋白(chromogranin)等多种抗体的阳性表达。由此可见，应用阴性表达抗体的反证法对于鉴别诊断来说是十分必要的。当然，如何选择最少的一组抗体就能达到最大的鉴别效果，则是一个长期工作的经验积累，从我们有限的工作中初步归纳如表1-2。

表1-2 肿瘤抗原的阳性或阴性表达

(7)当免疫组化结果与HE诊断不相符或相矛盾时，原则上仍以HE诊断为准。因为免疫组化结果的影响因素很多，目前还有不少抗原表达谱系不清楚，只有再进一步积累材料后才有修正HE诊断的基础，这一原则不可动摇。