乙醛的测定(比色法)

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1．方法原理

果实在贮藏中，乙醛含量有所增加，当乙醛含量过多积累时，就会影响果实的正常代谢。因此，在果实进行贮藏期间，对乙醛含量的分析测定是十分必要的。

乙醛可与亚硫酸钠结合而形成一种非挥发性的化合物。

CH₃CHO+Na₂SO₃→CH₃CHO·SO₃N_a

此化合物在硫酸铜及浓硫酸存在条件下与对羟基苯形成紫色。这种显色反应服从比耳定律，可以准确测定乙醛。

2．仪器与试剂

(1)仪器。三角瓶、试管、吸管、漏斗、水浴锅、抽气机、高速组织捣碎机、分光光度计。

(2)试剂。2%亚硫酸钠(用时配制)，5%硫酸铜、1%对羟基联苯、浓硫酸(相对密度1．84)、0．1%三聚乙醛。①1%对羟基联苯：称取1g对羟基联苯溶于25mL热的2mol／L氢氧化钠溶液中，冷却后加入75mL蒸馏水，放在棕色瓶中。②0．1%三聚乙醛贮藏液：将1mL重蒸馏的三聚乙醛溶液在1000mL蒸馏水中，即1000μL／L的贮藏母液，在冰箱中保存，可达2个月以上。

测定时取上述三聚乙醛母液2mL定量至100mL，浓度为20μL／L，再按表2－16稀释成2～15μL／L的标准液，待做标准曲线。

表2－16 制作三聚乙醛标准曲线的母液稀释数量

3．操作步骤

(1)样品提取。取果蔬样品200g，打浆(或直接压榨取汁)，双层纱布过滤，吸取滤汁5～15mL(视滤汁中乙醛含量高低而定，乙醛含量高，则吸取滤汁量相应减少)置于三角瓶中，加水20mL(三角瓶置于30℃恒温水浴中)，然后用橡皮塞塞紧，塞上打两孔，一孔插一玻璃管，与大气相通，其长度应达三角瓶内的液面以下。另一玻璃管与气体吸收瓶连接(如图2－45)，吸收瓶置水浴中，内加2%亚硫酸钠10mL，用大气采样器(或水泵)抽气，气流速度为300mL／min，吸收时间1～2h。

图2－45 乙醛提取装置

1－滤汁 2－水浴 3－吸收瓶 4－硅胶 5－大气采样器

(2)比色测定。取已吸收乙醛的吸收液1mL，放入长200mm×直径20mm的试管中，再加入0．05mL 5%硫酸铜，然后将试管置冰水中，缓慢加入8mL浓硫酸，摇匀。再加入0．2mL 1%对羟基联苯，摇匀后在30℃恒温下放置30min中间轻轻摇动试管数次，以后再将试管放入沸水中1．5min，冷却后呈紫色，在分光光度计560nm处比色。上述标准曲线稀释液也在同样条件下反应进行比色。

4．结果计算

以三聚乙醛浓度(μL／L)为横坐标，绘制标准曲线。根据样品吸收液的光密度，可从标准曲线上查出每毫升吸收液中的乙醛量(μg)，然后按下式换算成100mL果蔬汁液中含乙醛毫克数。

式中 ρ——由标准曲线查得的乙醛浓度，μL／L

V——比色用果蔬汁液体积，mL

10——吸收液总体积，mL

100——将汁液体积化为100mL

1000——将乙醛含量(μg)换算为mg