0．1N HCl浸提(DDTC测定法)

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1．适用范围：0．1NHCl适用于提取酸性土壤中有效铜，缺铜的临界值为1．9ppm。DDTC比色法测钢的适测范围是：10－30μg铜。

2．试剂配制

(1)0．1NHCl：将盐酸蒸馏纯化或者用等温扩散法纯化。

(2)1%DDTC溶液：DDTC钠盐在酸性溶液中不稳定，故须溶于稀碱溶液0．01NNaOH中，并保存于冰箱中，可使用数日。还可采用固体试剂，即将1份DDTC钠盐与9份NaCl在玛瑙研钵中研磨，使之混合均匀，每次用量为50mg左右。

(3)四氯化碳(CCl₄)：不含铜，可自行蒸溜纯化。

(4)铜标准溶液：将0．3928g硫酸铜(CuSO₄·5H₂O)溶于1N稀硫酸中，定容成1L，此为100μg／ml铜溶液。将其稀释50倍成为含铜2μg／m1的标准溶液。也可用纯铜片配制，将纯铜片溶于6NH₂SO₄中，浓度同上。

(5)柠檬酸铵—EDTA混合液：溶解200g柠檬酸铵和50gEDTA于1L水中，用1∶1NH₄OH调节至pH8．5。

3．测定步骤 称取通过2mm尼龙网筛的风干土壤5g，放入150m1三角瓶中，加入50m1 0．1NHCl，在振荡机上振荡1．5h。用离心机分离或者滤出清液。

吸取10ml滤液(含铜在10－30μg间)放入125m1分液漏斗中，加柠檬酸铵—EDTA混合液25ml，混匀后加入1%DDTC溶液3ml，约10min后反应完全，再加入CCl₄10m1，摇动分液漏斗5min，静放使水层和CCl₄层分离，放出CCl₄层至15m1离心管中，分液漏斗中的水液再用5mlCCl₄洗一次，将CC14层也倒入15ml离心管中，离心管加塞后，在离心机上用每分钟1200转速离心5min。同时配制标准系列含铜0，10，20，30，40μg溶液，为此可分别吸取含铜2μg／ml标准溶液0，5，10，15，20m1，如上述步骤显色。用440或450nm波长测定溶液的吸收值。以含铜微克为横座标，吸收值为纵座标绘工作曲线，然后计算结果。

4．结果计算