(8)烟叶和土壤中残留量检测方法

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中国农业科学院烟草研究所 曹爱华 徐光军 李义强 刘保安

样本用甲醇提取，二氯甲烷萃取，SPE-C₁₈柱净化，液相色谱法(UV)测定

1．主要仪器及设备

液相色谱仪 紫外检测器(UV)

超声波提取器

旋转蒸发器

2．主要试剂

甲醇、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯(重蒸)、氯化钠、盐酸

SPE-C₁₈

吡虫啉标准品

3．检测步骤

3．1 提取

称取10g干烟叶样本(鲜烟叶20g或土壤样本20g)，置于250mL具塞三角瓶中，加150mL甲醇浸泡过夜，超声波提取30min，过滤。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

量取75mL滤液(相当干烟叶5g、鲜烟叶10g、土壤10g)转入500mL分液漏斗中，加入100mL5%氯化钠溶液，用100mL石油醚洗涤1min，将下层水溶液转入另一分液漏斗中。石油醚相用50mL5%氯化钠溶液反萃取1次，弃去石油醚相。合并水相，加入0．5mL6mol／L盐酸溶液，用50mL、25mL、25mL二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠脱水，用旋转蒸发器浓缩至干，用石油醚2mL溶解残渣，待净化。

3．2．2 柱净化

将C₁₈柱用10mL甲醇预淋，至干，再用10mL去离子水预淋，至干。将样本溶液转入柱中，用10mL石油醚分3次洗瓶并淋洗柱子，淋出液弃去。用石油醚／乙酸乙酯(3∶7，V／V)洗脱，收集20mL洗脱液，浓缩至干，用甲醇定容，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 UV

波长 270nm

色谱柱 ()DS，150mm×4．6mm

柱温 30℃

流动相 甲醇／水(1∶1，V／V)

流速 1mL／min

进样量 20μL

保留时间 4．35min

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 2×10^－9g。

最低检测浓度 干烟叶和鲜烟叶均为0．03mg／kg，土壤0．003mg／kg。

回收率 干烟叶、鲜烟叶和土壤中添加吡虫啉0．1～2．0mg／kg时，平均回收率分别为88．6%～98．6%、93．0%～98．6%和88．4%～95．2%。见表1-21-14。

相对标准偏差 2．3%～8．1%，见表1-21-14。

表1-21-14 鲜烟叶、干烟叶和土壤中吡虫啉添加回收率及相对标准偏差实验结果