(1)花生仁、壳、植株和土壤中残留量检测方法

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山西省农业科学院植物保护研究所 秦曙 王霞 朱九生 周华 乔雄梧

一、代森锰锌残留量检测

样本中代森锰锌在加热的密闭顶空瓶中，遇HCl／SnCl₂时，消化反应生成的CS₂气体被瓶中的正己烷吸收，形成CS₂的正己烷溶液，气相色谱法(FPD-S)测定有机相中CS₂的量，代表代森锰锌的残留量。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪 火焰光度检测器(FPD-S)

电热恒温水浴锅

分散器

高速万能粉碎机

50mL顶空瓶 具聚四氟乙烯／硅橡胶密封垫(20mm)和密封铝盖(20mm)

2．主要试剂

正己烷(HPLC级)、氯化亚锡(SnClB2·2H2O)、浓盐酸(含量36%～38%)氯化亚锡／5mol／L盐酸溶液每100mL5m0l／L盐酸中含2g氯化亚锡(SnCl₂ 2H₂O)代森锰锌标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 土壤

称取5．0g混匀的土壤于50mL顶空瓶中，加5mL水、0．05g抗坏血酸、10mL氯化亚锡／5mol／L盐酸溶液和5．0mL正己烷，使用压盖器迅速将瓶口用聚四氟乙烯／硅橡胶密封垫(20mm)和密封铝盖(20mm)密封。放入85℃水浴中反应2h，每隔15min摇1次。冷却至室温，吸取上层有机相，测定。

3．1．2 花生仁

称取5．0g匀浆的花生仁于50mL顶空瓶中，加入0．05g抗坏血酸、10mL氯化亚锡／5mol／L盐酸溶液、5．0mL正己烷，以下操作同土壤。

3．1．3 花生壳

称取5．0g粉碎的花生壳于50mL顶空瓶中，加入0．05g抗坏血酸、10mL水、20mL氯化亚锡／5mol／L盐酸溶液、5．0mL正己烷，以下操作同土壤。

3．1．4 花生秧

称取10．0g剪碎混匀的花生秧，于50mL顶空瓶中，加入0．05g抗坏血酸、20mL氯化亚锡／5mol／L盐酸溶液、10．0mL正己烷，以下操作同土壤。

3．2 气相色谱法测定

检测器 FPD-S

色谱柱 3mmi．d．×1．5m玻璃柱，10%SE-30／Chromosorb W AW DMCS60～100目

检测温度 柱温60℃；进样口150℃；检测器150℃

载气 高纯氮，50mL／min

燃烧气 空气1．3kg／cm²，氢气0．9kg／cm2

进样量 2μL

保留时间 0．60min

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法测定

供试花生仁的平均含油率为50%，在酸解的过程中花生油进入正己烷相，使体积增加，在做添加回收和样本检测时，正己烷相的体积校正为7．5mL。

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 8×10^－11g(CS2)。

最低检测浓度 代森锰锌0．1mg／kg，二硫化碳0．03mg／kg。

回收率 准确称取代森锰锌标准品5．0mg左右，用100mL纯净水分数次将其洗入高颈烧杯中，然后放在分散器上匀浆2min，在液体不停旋转下，快速吸取定量溶液至对照样本中。

用对照土壤、花生秧、花生仁和花生壳样本进行添加回收率试验。每一浓度反应瓶分为两组：一组为样本处理，另一组为空白处理，空白处理只加入代森锰锌标准溶液，不加花生或土壤样本。以空白处理测得的CS₂比率计算添加回收率。

花生秧、花生仁、花生壳及土壤中添加代森锰锌0．1～2．0mg／kg时，平均回收率分别为80．8%～110．0%、81．0%～89．7%、71．9%～97．9%和73．4%～99．6%，见表2-20-1。

相对标准偏差 3．3%～22．0%，见表2-20-1。

表2-20-1 土壤、花生秧、花生壳和花生仁中代森锰锌添加回收率及相对标准偏差实验结果

二、乙撑硫脲(ETU)残留量检测

样本用甲醇提取，氧化铝柱层析净化，液相色谱法(UV)测定。

1．主要仪器及设备

液相色谱仪 紫外检测器(UV)

旋转蒸发器

循环水多用真空泵

分散器

高速万能粉碎机

层析柱 Φ10mm×10cm

实验室玻璃仪器，用前需经硅烷化处理

2．主要试剂

甲醇(优级纯)、乙醇(重蒸)、丙酮(重蒸)、二氯甲烷(重蒸)、氯化钠、氨水、纯净水

5%二甲基二氯硅烷正己烷溶液

1%和25%乙二醇丙酮溶液

淋洗液 乙醇／二氯甲烷(5∶95，V／V)

中性氧化铝 100～200目，用前130℃烘烤4h，干燥器中保存

助滤剂Celite545

上试102酸洗白色担体40～60目，pH6～8

乙撑硫脲(ETU)标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 土壤

称取20．0g土壤于250mL三角瓶中，加10mL水，用氨水调节至pH11～12。加入2．5g氯化钠、2．5g助滤剂和40mL甲醇，超声振荡5min，减压抽滤。用30mL甲醇分数次冲洗样本瓶和布氏漏斗。调整pH至7～9，定容至100mL，混匀。取该溶液50mL于圆底烧瓶中，加入3滴1%乙二醇丙酮溶液，用旋转蒸发器(60℃)浓缩至约5mL。加入3g担体，迅速振荡，直至所有团块全部散开，待柱层析净化。

3．1．2 花生仁、花生壳

称取10．0g匀浆后的花生仁，加10mL水(花生壳粉碎后称取10．0g，加50mL水)，用氨水调节至pH11～12。加入2．5g氯化钠、2．5g助滤剂和40mL甲醇，超声提取5min，减压抽滤。用30mL甲醇分数次冲洗样本瓶和布氏漏斗，调整至pH7～9，定容至100mL，混匀。取50mL该溶液(花生壳样本取该溶液20mL)于150mL分液漏斗中，分别用30mL、20mL、20mL石油醚洗涤3次，弃去石油醚相。水相放入圆底烧瓶中，加入3滴1%乙二醇丙酮溶液，用旋转蒸发器(60℃)浓缩至约3mL。加入3g担体，迅速振荡，直至所有团块全部散开，待柱层析净化。

3．1．3 花生秧

称取5．0g剪碎混匀的花生秧，加10mL水，用氨水调节至pH11～12。加入2．0g氯化钠、1．5g助滤剂和40mL甲醇，超声提取5min，减压抽滤。用40mL甲醇分数次冲洗样本瓶，超声处理后抽滤。用HCl调整滤液至pH7～9，定容至100mL，混匀。取该溶液20mL于150mL分液漏斗中，分别用30mL、20mL、20mL石油醚洗涤3次，弃取石油醚相。水相放入圆底烧瓶中，加入3滴1%乙二醇丙酮溶液，用旋转蒸发器(60℃)浓缩至约3mL。加入3g担体，迅速振荡，直至所有团块全部散开，待柱层析净化。

3．2 净化

3．2．1 土壤

称取5g中性氧化铝，湿法装柱，用30mL二氯甲烷／乙醇(95∶5，V／V)预淋。在上述提取浓缩液中加入10mL淋洗液，摇匀后转入柱中，弃去淋出液。用50mL淋洗液分3次漂洗烧瓶并加入柱中用于洗脱。收集洗脱液，加入3滴25%的乙二醇丙酮溶液，减压浓缩(40℃)至约2mL，氮气吹干，用甲醇／水(3∶7，V／V)定容至2．5mL，待测。

3．2．2 花生仁、花生壳和花生秧

称取5g中性氧化铝，湿法装入层析柱中，分别用20mL二氯甲烷／乙醇(95∶5，V／V)和10mL二氯甲烷预淋。在上述提取浓缩液中加入10mL二氯甲烷，摇匀后转入柱中，再用20mL二氯甲烷、10mL淋洗液漂洗烧瓶并加入柱中，弃去淋出液。用50mL淋洗液分3次漂洗烧瓶并加入柱中用于洗脱。收集洗脱液，加入3滴25%的乙二醇丙酮溶液，减压浓缩(40℃)至约2mL，氮气吹干，用甲醇／水(3∶7，V／V)定容至2．5mL，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 UV

波长 254nm

色谱柱 Kromasil C18，4．6mm×250mm×5μm

流动相 甲醇／水(30∶70，V／V)

流速 0．4mL／min

进样量 20μL

保留时间 7．02min

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1．0×10^－9g。

最低检测浓度 0．05mg／kg。

回收率 花生秧、花生仁、花生壳及土壤中添加ETU0．05～1．00mg／kg时，平均回收率分别为80．4%～86．3%、88．3%～99．5%、69．0%～74．9%和83．7%～91．8%。见表2-20-2。

相对标准偏差 0．3%～9．6%，见表2-20-2。

表2-20-2 土壤、花生秧、花生壳和花生仁中ETU添加回收率及相对标准偏差实验结果