糙米、稻壳、植株、土壤和田水中残留量检测方法

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广东省农业科学院植物保护研究所 刘艳萍

样本用乙腈提取，二氯甲烷、乙醚液-液分配，甲基化衍生，正己烷液-液分配，硅胶柱层析净化，气相色谱法(NPD)测定。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪 氮磷检测器(NPD)

往复式振荡机

旋转蒸发器

高速匀质器

层析柱 10mm×210mm

2．主要试剂

丙酮、正己烷、甲醇、二氯甲烷、乙醚、苯、乙腈、甲基碘、二甲基亚砜、聚乙二醇、无水硫酸钠、硅胶

乙氧磺隆标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 糙米、稻秆、稻壳、稻苗、土壤

称取20．0g粉碎糙米(稻秆、稻壳、稻苗各10．0g，土壤50．0g)，置入250mL三角瓶中。加入20～40mL蒸馏水湿润30min，用120mL乙腈浸泡过夜。振荡提取20min，过滤。残渣用30mL、30mL乙腈／水(80∶20，V／V)洗涤。合并滤液，加入1mL1%聚乙二醇丙酮溶液，用旋转蒸发器(45℃)减压浓缩至约20mL。

3．1．2 田水

无需提取，直接进行液-液分配操作。

3．2 液-液分配

上述浓缩液(或田水样品)转移入250mL分液漏斗中，加入4g氯化钠，3mL1mol／L盐酸(使pH≤3)，用15mL、15mL、20mL、50mL二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠脱水，加入1mL1%聚乙二醇丙酮溶液，用旋转蒸发器减压浓缩(45℃)至干。用30mL蒸馏水溶解残渣并转入250mL分液漏斗，加3g氯化钠、1mL10%氢氧化钠，使pH≥9，用15mL、15mL、20mL乙醚洗涤，每次2～3min。弃去乙醚相，水层加4mL1mol／L盐酸酸化(pH≤3)，用50mL、50mL乙醚萃取。合并乙醚相，经过无水硫酸钠干燥，加1%聚乙二醇丙酮溶液，用旋转蒸发器(45℃)减压浓缩近干。

3．3 甲基化

上述蒸残物用1mL二甲基亚砜溶解并转入50mL具磨砂塞三角烧瓶中，加入2mL苯、1mL甲基碘和40mg氢氧化钠，放入磁力搅拌棒，加塞密封，置于1000mL烧杯杯内，加入1．5cm高水，用磁力搅拌机，在60℃下搅拌反应3h。冷却后加入10mL蒸馏水到三角瓶中溶解过量的氢氧化钠。

3．4 液-液分配

将反应后的溶液转入250mL分液漏斗，用10mL、10mL、10mL、40mL正己烷萃取。合并正己烷相，经无水硫酸钠脱水，用旋转蒸发器(45℃)减压浓缩近干。

3．5 柱层析净化

在层析柱中装入5．0g硅胶和2g无水硫酸钠，用8mL正己烷预淋。用5mL丙酮／正己烷(5∶95，V／V)分4次溶解上述残渣入柱，淋出液弃去。用40mL丙酮／正己烷(15∶85，V／V)洗脱，收集洗脱液，用旋转蒸发器(45℃)减压浓缩至近干，用甲醇定容，待测。

3．6 气相色谱法测定

检测器 NPD

色谱柱 3mm×2m玻璃柱，1%Carbowax20M／Chromosrib AW DMCS80～100目

检测温度 柱温180℃；进样口235℃；检测器275℃

载气 高纯氮，1mL／min

燃烧气 氢气3mL／min，空气100mL／min

进样量 1L

保留时间 1．5min

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1．6×10^－10g。

最低检测浓度 糙米、稻秆、稻壳、秧苗为0．01mg／kg，土壤、田水为0．01mg／kg。

回收率 各类样本中添加乙氧嘧磺隆0．01～0．10mg／kg时，平均回收率为77．8%～102．7%。见表3-16-1。

相对标准偏差 2．8%～13．6%，见表3-16-1。

表3-16-1 糙米、稻苗、稻壳、田水和土壤中乙氧磺隆添加回收率及相对标准偏差实验结果