糙米、稻壳、植株、土壤和田水中残留量检测方法

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浙江省农业科学院农产品质量标准研究所 吴俐勤 徐浩

样本用石油醚／乙酸乙酯提取，磷酸氢二钠溶液水洗，SPE-C₁₈柱净化，液相色谱法(UV)检测。

1．主要仪器及设备

液相色谱仪 紫外检测器(UV)

恒温振荡器

旋转蒸发器

快速精米机

超声波清洗器

固相萃取器

2．主要试剂

甲醇(重蒸)、丙酮、石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯、氯化钠，磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)、冰醋酸、二次重蒸水

SPE-C₁₈柱 500mg／5mL

环丙嘧磺隆标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 田水

取200mL样本于分液漏斗中，加入5g氯化钠、1mL6mol／L盐酸，用25mL石油醚、25mL乙酸乙酯萃取，合并有机相。

3．1．2 糙米、稻壳、稻秆、土壤

称取50g糙米(稻壳10g、稻秆10g、湿土50g)置于250mL平底三角烧瓶中，加入80mL丙酮、60mL乙酸乙酯浸泡过夜。振摇提取1h，过滤。再加30mL、30mL石油醚振摇、洗涤。合并滤液转入500mL分液漏斗中，加入200mL5%氯化钠溶液、1mL6mol／L盐酸，振摇萃取。分离后下层水相再用25mL石油醚、25mL乙酸乙酯萃取一次。合并有机相。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

将合并后的有机相用100mL、100mL、50mL2%磷酸氢二钠溶液反萃取。合并下层水相，用6mol／L盐酸6～8mL调节pH1．5～2．5，再用50mL×3石油醚／乙酸乙酯(1∶1，V／V)萃取。合并有机相，经无水硫酸钠脱水后，稻壳和稻秆的样本待柱层析净化；田水、土壤、糙米样本溶液浓缩至干，用HPLC流动相定容，经0．45μm有机相滤膜过滤，待测。

3．2．2 SPE-C₁₈柱净化

SPE-C₁₈柱用10mL甲醇和10mL水预淋，稻壳和稻秆的样本溶液浓缩至干后，稻壳样本以2mL、2mL、1mL甲醇溶解转入柱中。收集淋出液，定容待测；稻秆样本以1mL甲醇用超声波作用溶解，再加入4mL水混匀，转入柱中，重复两次。淋出液弃去。再以8mL流动相洗脱，收集全部洗脱液。待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 UV

波长 260nm

色谱柱 Supelcosil^TM LC-18，5m，250×4．6mmI．D．

流动相 甲醇／水／冰醋酸(100∶50∶0．9，V／V／V)

流速 1．0mL／min

柱温 50℃

进样量 20μL

保留时间 7min12s

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1．0×10^－9g。

最低检测浓度 糙米0．005mg／kg，稻壳0．02mg／kg，稻秆0．02mg／kg，土壤0．005mg／kg，田水0．005mg／L。

回收率 田水中添加环丙嘧磺隆0．01～0．50mg／L时，平均回收率为93．0%～97．8%；糙米、土壤和稻壳中添加环丙嘧磺隆0．05～2．00mg／L时，平均回收率为76．1%～105．3%；稻秆中添加环丙嘧磺隆0．20～2．00mg／kg时，平均回收率为80．9%～95．3%。见表3-13-1。

相对标准偏差 1．9%～11．3%，见表3-13-1。

表3-13-1 田水、糙米、土壤、稻壳、稻秆中环丙嘧磺隆添加回收率及相对标准偏差实验结果