核酸分子杂交
利用异源单链核酸分子间通过结构互补发生共价键结合形成互补杂合双链,进行分子遗传学研究的技术。 双链核酸分子的稀盐溶液加热到80~100℃的某个特定温度,由于碱基对之间的氢键断开,形成两条单链,这一过程称核酸的变性或解链。此时如迅速冷却,则两条分开的单链不能复原,仍保持单链状态;如缓慢地冷却,则两条分开的单链又可重新专一性地恢复成双链分子,这一过程称核酸的复性或退火。 核酸分子在pH>10和pH<3的环境中也会变性,当条件适合时又可复性。核酸分子杂交技术是基于核酸变性和复性的原理。 利用核酸杂交技术进行定性或定量分析的最有效方法是将一种核酸单链用同位素或荧光物质标记,制成探针(见“核酸分子探针”),再与另一种核酸单链杂交,检测与之互补的核苷酸顺序。如果两条单链核苷酸顺序完全互补地相对应,则两条单链可以100%地相结合;如果不是完全互补地相对应,则两条单链可以按相应的百分比相结合或杂合。 因此可以利用核酸分子杂交检测不同细菌核酸的核苷酸顺序的相似程度,借以判断各种细菌间的亲缘关系。 |