柑橘中残留量检测方法

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浙江省农业科学院农产品质量标准研究所 李振 叶兴祥

样本用氢氧化钠／甲醇溶液提取，三氯甲烷萃取，硅胶柱层析净化，液相色谱法(FLD)测定。

1．主要仪器及设备

液相色谱仪(柱后衍生装置)荧光检测器(FLD)

匀浆机

台式恒温振荡器

恒温水浴锅

真空旋转蒸发器

超声波清洗器

层析柱 Φ8mm×40mm

2．主要试剂

甲醇、三氯甲烷、盐酸胍、高氯酸、0．5mol／L氢氧化钠、25%氨水、0．15%茚三酮溶液、0．1N乙酸钠缓冲液(pH6．5)、0．1N乙酸甲醇溶液、硅胶(60～80目)

pH2．0缓冲液 甲醇／水／氨水(32∶65∶3，V／V／V)

二次蒸馏水 过50μm滤膜

双胍辛胺标准品

3．检测步骤

3．1 提取

称取10g橘皮(橘肉20g加1．0g盐酸胍)，加盐酸胍0．5g和1．0mL20mg／kg内标物，用50mL2mol／L的氢氧化钠／甲醇溶液，振荡提取30min，提取液滤入500mL分液漏斗中。再用50mL该溶液振荡提取10min，过滤。滤渣用少量甲醇洗涤，合并提取液于分液漏斗中。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

在分液漏斗中加入100mL蒸馏水，用50mL×2三氯甲烷萃取，每次5min。合并三氯甲烷相，过无水硫酸钠层滤入平底烧瓶，加入2mL0．1N乙酸甲醇溶液。

3．2．2 柱层析净化

在层析柱中，用石油醚湿法装柱中充填700mg硅胶，将上述三氯甲烷萃取液转入柱顶并淋洗柱子，弃去淋出液。依次用5mL甲醇、5mL0．1N乙酸甲醇溶液和1mLpH2．0缓冲液淋洗，弃去。最后用4mLpH2．0缓冲液洗脱并收集，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 FLD，Ex=395nm，Em=500nm

流动相 甲醇／水／氨水(32∶67∶1，V／V／V，调节pH=2．5)

流速 0．7mL／min

柱后衍生装置 带双线圈双泵的反应器

0．5mol／L氢氧化钠水溶液 2．0mL／min

0．15%水合茚三酮溶液 0．7mL／min

保留时间 标样8min30s，内标物17min30s

4．结果计算

以双胍辛胺衍生物与内标的峰高之比对重量之比作标准曲线定量。

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 5×10^－9g。

最低检测浓度 橘皮0．02mg／kg，橘肉0．01mg／kg。

回收率 橘皮中添加双胍辛胺及其降解物0．2～2．0mg／kg时，平均回收率分别为75．1%～108%和78．3%～89．8%；橘肉中添加双胍辛胺及其降解物0．1～1．0mg／kg时，平均回收率分别为83．3%～96．3%和87．7%～108%。见表2-13-1。

相对标准偏差 1．7%～13．9%，见表2-13-1。

表2-13-1 柑橘皮和肉中双胍辛胺添加回收率及相对标准偏差实验结果