食用菌菌种保藏storage of edible fun-gi

用低温、干燥、隔绝空气等手段. 降低食用菌种源的菌丝体或孢子的生命活动，延长其寿命，并保持其原有性状的措施。最早的方法是将菌种培养在基质上，在常温下保藏，每隔一定时间进行移植传代。这种方法保藏时间短，移植频率高，细胞质中有遗传能力的质粒，DNA等物质容易缺失、变异，菌种容易退化。20世纪以来，各种能够延长菌种寿命的先进保藏技术陆续出现。1909年布勒(Buller)发明了真空干燥保藏，1934年采用冰箱及矿物油保藏，1942年雷珀(A.Raper)首创真空冷冻干燥保藏技术，1965年美国菌种保藏中心(ATCC) 开始采用液氮超低温保藏。根据保藏时菌种活性高低，分为活性保藏和非活性保藏两类。活性保藏有斜面低温保藏、石蜡油（矿油）保藏、土壤保藏、胶塞封口保藏、生理盐水保藏和深度低温保藏等数种，这类保藏都用菌丝菌种为材料，通过低温，减少氧气供应量等措施，降低呼吸代谢水平。但保藏的菌种仍有一定程度的呼吸代谢，到一定时间后必须进行移植传代，可保藏1～3年： 非活性保藏有液氮超低温保藏、滤纸保藏、沙土管保藏数种。此类方法保藏的菌丝或孢子完全处于休眠状态中。因而分离移植次数少，菌种性状较为稳定，适宜长期保藏。
活性保藏 有下述方法： ❶斜面低温保藏。取壮龄的斜面菌种，用防潮的油纸或硫酸纸包扎试管口，置于温度稳定在3～5℃，空气相对湿度60%左右处保藏，半年移植培养一次。
❷斜面石蜡油保藏。先将石蜡油于1.5公斤/平方厘米蒸气压力下灭菌2小时，再于170℃中干燥处理1～2小时，直至石蜡油完全透明，冷却。在无菌条件下，将灭菌石蜡油倒入待保藏的斜面菌种试管内，高度超出斜面培养基顶端1厘米，4～15℃及较干燥的条件保藏。不时补充石蜡油，不使培养基露出液面。每隔2～3年移植一次。
❸基质保藏。将适宜的天然培养基物装入250～500毫升广口瓶内，压实培养料，灭菌、接种、培养后，3～5℃条件下保藏。隔3～4年移植一次。
❹胶塞保藏。生长良好的斜面菌种，用灭菌的胶塞替换棉塞，管口边缘封蜡，3～5℃保藏。隔2年移植一次。
❺生理盐水保藏。取液体发酵培养的菌丝球，移入生理盐水试管中，塞胶塞，用石蜡封口，3～5℃保藏。
❻土壤保藏。取菜园土或熟土，捣碎，过筛，调节水分至土壤含水量20%左右，装于试管中，1.5公斤/平方厘米蒸气压力下灭菌3小时，24小时后重复灭菌一次。将刚长好的菌种混入土中，培养，3～5℃保藏。
❼深度低温保藏。将刚长好的试管菌种，放入-10～-20℃保藏。
❽全活性保藏。有些菌种如草菇、林地菇等，在2～4℃低温下迅速死亡，其菌种只能在15℃左右的较低温度下保藏，3个月左右移植一次。
非活性保藏 有如下方法： ❶砂土管保藏。适于孢子保藏。用60～80目筛子筛取细砂，用盐酸浸泡24小时，除去有机质，再用清水冲洗至中性，加入研细的黄土，比例为2比1，装于试管中，160℃下灭菌2小时，冷却后，拌入待保藏的孢子液，立即进行真空干燥，在常温或2～4℃条件下保藏。隔3～4年移植一次。
❷滤纸保藏。用无菌操作采收孢子，制成孢子悬液，滴于滤纸上，装入安瓿，真空干燥，封口，在4～15℃条件下保藏。
❸液氮超低温保藏。保藏对象是孢子或菌丝，菌种多做成液体种或谷粒种，液体种需过滤得浓缩菌丝球。所用的保藏液，一般为甘油或二甲亚砜或吐温，其组成为甘油等保护剂10%，液体培养基90%，灭菌，倒入安瓿。再放入菌种，封口，然后放入液氮罐内。菌种放入液氮罐前，需先逐渐冷却至-30℃，冷却速度为每分钟降低1℃，或将待保藏的密封的小玻璃瓶（安瓿）从罐口分步渐次放入液氮内，以达逐渐降温的要求。菌种使用时，从液氮内取出，直接放入30～35℃的温水中，直至保藏液完全溶化。
❹真空冷冻干燥保藏。菌丝或孢子液用血清或含蔗糖的培养液或脱脂牛奶制成，灌入小玻璃瓶内，然后在冷冻干燥系统上真空干燥，封固瓶口。
菌种保藏必须采用健壮的菌丝或孢子，且有较高的密度，实际工作时常同时采用几种方法。

食用菌菌种保藏spawn preservation of edible fungi

保持优良食用菌菌种纯正并能长期在生产上应用的技术。食用菌的代谢活动越旺盛，变异速度越快。可通过控制环境条件和基质养分等，使菌种代谢处于微弱状态，以达到长期保藏的目的。常用的保藏方法有斜面冰箱法、自然基质风干法、斜面矿油法、孢子滤纸法、干孢子真空法和液氮超低温法等。