酶免疫技术
酶免疫技术是用酶作为标记物,进行抗原或抗体追踪的一项定位、定性和定量的技术。这是继免疫荧光技术及同位素标记技术以后发展起来的另一类标记免疫技术。
酶免疫技术是把抗原抗体反应的特异性与酶的高效专一催化底物的能力结合而形成的。通过化学方法,使酶与抗原(或抗体)结合,形成酶标记物。酶标记物仍保持其免疫活性和酶的活性。然后使酶标记物与相应的抗体(或抗原)起反应,形成酶标记的免疫复合物。结合在免疫复合物上的酶,在遇到相应的酶的底物时,催化其水解、氧化还原等反应,使生成有色产物。酶降解底物的数量与呈现的色泽浓度成正比例,由此而计算出被检测的抗体(或抗原)的含量。如生成的产物为可溶性物质,则可用肉眼进行定性测定,或用比色法进行定量测定; 如生成的为不溶性的沉淀物,则可用光学显微镜进行抗体(或抗原)的定位研究。有些酶标记物进行免疫组织化学反应时,由于产生的有色沉淀物具有一定的电子密度,则可用电镜进行观察。
酶免疫技术的特点是灵敏度高、特异性好、应用范围广,可用于组织细胞中抗原、抗体定位以及体液中抗原、抗体定量。使用试剂安全、稳定、有效期长,不需要特殊设备,适用于一般实验室。
酶免疫技术可分为酶免疫组织化学法和酶免疫测定法两大类。酶免疫组织化学法是在免疫荧光技术基础上发展起来的,用于组织或细胞中抗原或抗体的定位与半定量的研究(参见“免疫电镜技术”)。酶免疫测定法是在酶免疫组织化学法和放射免疫测定法的基础上发展起来的,用于检测体液中的抗原或抗体的酶免疫技术。酶免疫测定法又可分为固相酶免疫测定法和酶放大免疫试验。在固相酶免疫测定法中,可将抗原或抗体吸附到固相载体(塑料管或微量塑料板)上进行酶免疫测定,称为酶联免疫吸附试验。或以琼脂糖珠颗粒为固相载体,以化学方法将抗原或抗体偶联在4B珠(即免疫吸附剂)上,使免疫反应在4B珠上进行。然后借显示特异性结合酶标记抗体的酶对底物催化所产生的有色产物,对抗原和抗体进行定性和半定量测定。这是一种免疫吸附剂和酶标记抗体相结合的免疫学技术。其原理与酶联免疫吸附试验相同。酶放大免疫试验是直接检测小分子半抗原的一种快速简便方法。
酶免疫技术广泛地应用于微生物学、寄生虫学、内分泌学、肿瘤学、血液学、免疫病理学及药理学等方面。