诊断用酶试剂

诊断用酶试剂是一类生化试剂，是利用酶反应的专一性和快速灵敏的特点，能定量测定体液内某一成分，作为诊断病情的参考。商品化的诊断用酶试剂盒是由一个或几个酶及其他辅助试剂共同组合成为一个酶反应系统。当加入待测物质（亦即酶的底物）后，酶即与底物反应，反应产物往往再通过偶联反应，使最终的反应产物能够作为检测的信号（例如色素产生的显色信号）。可用光电比色计或分光光度计测出其吸收值，从而求出底物浓度。
用于配制诊断用酶试剂的酶有氧化酶、脱氢酶、激酶、水解酶等。根据待测物质的性质，选择适当的酶，设计一个灵敏的反应系统，组成一个酶试剂盒。
诊断用酶试剂于1935年起普遍推广应用，特别是化验血清胆固醇、甘油三酯、葡萄糖等十余个常规测定项目，已完全用酶法测定。方法简便，灵敏度高。如有自动化测试仪配合使用则效益更大。现把临床常用酶试剂的反应系统简介如下。
(1) 利用葡萄糖氧化酶测定血糖： 反应式如下：

首先葡萄糖氧化为D-葡萄酸及H₂O₂。在过氧化物酶存在下，加4-氨基安替比林及苯酚，过氧化氢能氧化4-氨基安替比林并与苯酚缩合成为有色物质醌亚胺。此时所用的酶要过量，底物浓度相对地要低。其他反应物的量也要过量。由于过量，反应时酶浓度及其他反应物浓度可视作不变。故醌亚胺生成量取决于底物的浓度。当反应平衡后可用光电比色计在500nm波长读数。根据葡萄糖浓度及吸收值读数所作的标准曲线，推算出样品中葡萄糖含量。
(2)利用脂肪酶及甘油脱氢酶测定血清甘油三酯： 反应式如下：

甘油三酯先被脂肪酶水解产生甘油及脂肪酸，此时在甘油脱氢酶及辅酶Ⅰ(NAD⁺)的存在下，甘油脱氢生成二羟丙酮，NAD+则还原为NADH，在此反应系统中如果除了待测物质（甘油三酯）以外，使影响反应速度的其他反应物（包括脂肪酶及甘油脱氢酶）浓度远超过待测物质之量，那末，反应的起始速度完全取决于待测物质的浓度。用紫外分光光度计在340nm波长测出NADH的起始生成速度。根据不同底物浓度与反应起始速度所作出的标准曲线，可求出待测物质的浓度。
(3) 血清肌酸激酶测定： 此时虽然被测物质是酶，但另外需要己糖激酶及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶与它组成一个酶系统。此外必须加入肌酸激酶的底物（即肌酸磷酸）以促进反应。整个反应系统的设计，包括葡萄糖和ADP等共三个反应式：

在过量的ADP及肌酸磷酸存在下，反应产物ATP与肌酸磷酸激酶的浓度成正比。在葡萄糖及己糖激酶的过量存在下，葡萄糖-6-磷酸的生成浓度又与ATP浓度成正比。此时如有过量的葡萄糖-6磷酸脱氢酶及辅酶Ⅱ(NADP)，生成的NADPH浓度又与葡萄糖-6-磷酸的浓度成正比。也即与肌酸磷酸激酶的浓度成正比。
(4)利用胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶及过氧化物酶测定血清总胆固醇： 反应式为：

醌亚胺产生的色泽深浅可在500nm波长处读出，由此推算出胆固醇之量。
(5)利用尿酸酶及过氧化物酶进行尿酸的测定，反应式为：

释放的H₂O₂可用过氧化物酶与测定胆固醇同样原理测出，由此推算出尿酸之量。
(6)利用谷氨酸脱氢酶测定血氨：反应为：

可根据NADH在340nm波长处吸收值的减少，推算出血氨含量。
(7)利用磷酸甘油酸激酶及磷酸甘油酸脱氢酶测定三磷酸腺苷： 反应式为：

根据NADH在340nm波长处吸收值的减少，推算ATP之量。
(8)利用乙醇脱氢酶及心肌黄酶测定乙醇：反应式为：

根据红色素深浅，用光电比色计在500nm波长处读数，推算出乙醇之量。
(9)利用尿酶测定尿素： 反应式为：

根据色素深浅，用光电比色计在500～650nm波长处读数，推算出尿素之量。
(10)利用苹果酸脱氢酶测定谷草转氨酶反应式为：

可根据NADH的减少推算酶量。
(11)利用乳酸脱氢酶测定谷丙转氨酶：反应式为：

可根据NADH的减少推算酶量。