荧光显微镜术fluorescence microscopy

是用紫外线做光源，激发组织标本中的荧光物质发出荧光，在特制的荧光显微镜下观察荧光的分布情况。应用更多的是先用荧光染料处理组织标本，再在荧光显微镜下观察。常用的荧光染料有吖啶橙、阿的平等。用荧光显微镜术能够对细胞和组织中的某些成分进行定性和定位观察。

荧光显微镜术

荧光显微镜术不论在原理上或实际设施上都与普通光学显微镜术迥然不同。荧光系依靠荧光素物质的存在，经其吸收较短光波之光后，激发并释放出表现为能量降级的其他较长光波的可见光，一般都是绿、黄或红色荧光。荧光显微镜术，就是包括借短波光光源，将标本中含有荧光素的物质，激发出可见的荧光并在显微镜中观察的技术。因此，荧光显微镜与普通光学显微镜的不同在于：
❶有一个能产生较短光波，如蓝或紫及紫外光光谱的光源设施，例如高压汞灯装置。
❷有一套可供选择的激发滤光镜片，如UG,BG等褐色或蓝紫色镜片，放在标本与光源之间。此滤片可选择对标本中荧光素物质合宜的激发光通过，一般是蓝紫光或绿光。
❸有一套保护眼睛及提高荧光与视野背景反差的屏障（或称反差）滤光片。它的作用是只容许荧光通过，而不使光源光通过。有此三项条件即可将任何 一台普通光学显微镜改造成荧光显微镜。但要考虑聚光镜以及接物镜、接目镜等都不能使用含有荧光物质的玻璃镜片。从此点考虑，暗视野映光法较优于亮视野透射映光法，同时荧光与背景的反差效果也有显著的改进，这是因为暗视野映光法的激发光源光不直接进入接物镜的缘故。自1964年Ploem发现干涉分滤片后，现在更多的荧光显微镜采用Ploem式落射光映光法，因为所得的荧光较强并兼有暗视野映光法的优点。荧光显微镜术也可视需要的不同而运用相差和干扰反差技术，做出相差荧光及干扰反差荧光等，特别是在组织学荧光探查技术和免疫荧光技术中用途较多。

图1 落射光型荧光显微镜

L: 光源及聚光镜； E:激发滤光片； Oc:接目镜； F:屏障滤光片；S: 部分透光镜片； O:接物镜； P:标本

图2 透射光型荧光显微镜

L:光源及聚光镜；E:激发滤光片；Oc:接目镜； F:屏障滤光片； O:接物镜； P:标本； K:聚光镜；S:全反射镜