聚丙烯酰胺凝胶电泳polyacrylamide gel electrophoresis

一种以聚丙烯酰胺凝胶为支持介质的电泳技术。这种凝胶具有分子筛的作用，因此分离效果比其他电泳好。先把丙烯酰胺单体和甲撑双丙烯酰胺交联剂溶解在适当的缓冲液中，加入少量催化剂或在日光灯照射下，使丙烯酰胺交联聚合成凝胶，其孔径大小可根据需要而控制。凝胶的制备一般在玻璃管内进行，制成后将管直放在两个电极槽之间，加样品及缓冲液后进行电泳，然后将凝胶管染色，样品组分分离成很薄的盘状区带，可进行定性和定量分析。亦可将凝胶做成板状，直接放在电泳仪里进行电泳，称为垂直直板形电泳。

聚丙烯酰胺凝胶电泳polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE

是对DNA、RNA及蛋白质分析与分离的重要手段之一。离子和带电荷的大分子在电场内泳动，泳动的速度依据其分子大小和形状，分子上所带电荷的强弱，通电流的强度以及介质对电流抵抗的大小而变化，因而行成分开的条带。(1)DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳：PAGE可根据电泳样品的电荷，分子大小及形状的差别分离物质，即具有分子筛效应，又具备静电效应，分辨率高于琼脂糖电泳。适用于寡核苷酸的分离和DNA的序列分析。与琼脂糖电泳相比，具有如下优点：
❶分辨力强，即使最大的片段比最小的片段长500倍也能很好地分离；
❷所能装载的DNA量远远大于琼脂糖凝胶；
❸从PAGE中回收DNA纯度很高，可适用于要求高的实验。(2)RNA聚丙烯酰胺凝胶电泳垂直板凝胶电泳：可以同时进行几个不同RNA样品或大剂量RNA样品的分离和分析。(3)蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳：
❶SDS变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳原理是根据蛋白质分子量的差异，SDS是一种阴离子表面活性剂，能与蛋白质的疏水部分结合，使蛋白质带上大量SDS阴离子。蛋白质分子由此带上大量负电荷，并远远超过其原来所带的电荷。因此蛋白质之间有电荷的差异就无显著效应。SDS还使蛋白质的结构变得疏松，形状趋于一致，SDS-蛋白质复合物泳动的快慢只与分子量有关。PAGE不仅具有分子筛作用，还有浓缩效应。由于不连续pH梯度作用，样品被压缩成一条狭窄区带，从而提高了分离效果。
❷非变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳：该电泳系统的试剂、材料、制胶、电泳等操作过程与SDS-PAGE完全相同。唯一的区别是所有的试剂均不含SDS。
❸非变性连续聚丙烯酰胺凝胶电泳：连续电泳系统是采用一种pH值，一层凝胶和一种缓冲液系统。操作同SDS-PAGE。