维生素测定

测定体液维生素的主要目的是诊断维生素缺乏和调查营养水平。常用的维生素测定如下：
维生素A测定 维生素A属脂溶性维生素，在肝脏、乳汁和蛋黄中含量丰富，黄绿色植物如胡萝卜、玉米、菠菜和辣椒等，含有胡萝卜素，即维生素A原，被吸收后，在小肠壁和肝脏内转变为维生素A。胡萝卜素测定最简便的方法，是利用胡萝卜素的黄色，用乙醇沉淀血浆蛋白，再用石油醚将其提取，在450nm波长比色。维生素A测定，是用有机溶剂将维生素A提取后，加入三氯化锑或三氯氟乙酸，呈色后，比色测定。正常值β胡萝卜素血清或血浆为40～200μg/dl (0.74～3.72μmol/L)，但易受饮食中胡萝卜素含量影响； 维生素A正常值血清或血浆为15～60μg/dl (或0.53～2.10μmol/L)，也可用国际单位IU表示，1IU=0.3μg=0.6μgβ-胡萝卜素。成人维生素A<10μg/dl，可诊断为维生素A缺乏症。维生素A过高也属不正常，见于急性或慢性维生素A中毒。血中胡萝卜素增加，称胡萝卜素血症见于粘液性水肿、糖尿病等。组织和皮肤因有较多的胡萝卜素沉着，可呈黄色，应与黄疸鉴别。胡萝卜素减低见于肝硬变。
维生素B₁测定 维生素B₁的分子结构上含有硫和氨基，故又称硫胺素。它在糖代谢的丙酮酸氧化脱羧反应中，起羧化辅酶作用，故又称羧化辅酶。测定维生素B₁常用的方法有：
❶硫色素荧光法： 维生素B₁经亚硝酸盐或硫酸盐处理后，在有氧化剂的碱性溶液中，与高铁氰化钾作用，生成具有荧光的蓝色硫色素，比色测定；
❷重氮法： 维生素B₁与对氨基乙酰苯胺或甲基对氨基苯乙酮作用，形成不溶性化合物，再与亚硝酸盐呈重氮反应，产生紫色，比色测定；
❸微生物法： 利用某些微生物，如乳酶杆菌₃₆(lactobacillus fermenti₃₆)依赖维生素B₁生长的特性，测定维生素B₁，正常值：微生物法血清为25～80ng/ml; 尿为100～400μg/24h。维生素B₁降低见于维生素B₁缺乏症、糖尿病等。
维生素B₁₂测定 维生素B₁₂是含钴维生素，又称钴胺素。主要参与一碳基团的转移，并使叶酸还原为四氢叶酸等作用。通过对一碳基团的转移和促进叶酸的利用，增加核酸的合成。如缺乏，可以影响细胞的发育成熟和中枢神经系统的完整性。维生素B₁₂测定方法有：
❶化学法： 先将其分解为5,6-二甲基异吡唑，再进行氰化，而后将结合的氰离子释放，测定结合氰离子量，间接计算维生素B₁₂含量，此法操作复杂；
❷微生物法： 是利用某些微生物生长时必需维生素B₁₂的特性，将微生物加于被检标本中，观察微生物生长情况，推算维生素B₁₂的含量。其结果可用细菌计数、培养液比浊、滴定细菌所产生的酸或碱、细菌色素比色和细菌在培养平板生长的面积等方法表示。此法测定维生素B₁₂比较敏感，正常值可因菌株不同有所差别，如用李氏乳酸杆菌(ATCC7830或4790)正常值：全血为460～1500pg/ml，血清为100～900pg/ml。维生素B₁₂减低见于恶性贫血、某些肠内寄生虫病、全胃或部分胃切除术后、萎缩性胃炎、妊娠后期和巨幼红细胞贫血等。妊娠期母血维生素B₁₂虽较低，但胎儿血中一般正常，甚至可高于母血。成人每日约需维生素B₁₂ 1μg，一般食物所含量远超过此数，仅肝中约贮有1.5mg即可供2～3年的需要。维生素B₁₂的化学性质较稳定，故由摄入不足引起缺乏者很少见，其缺乏的原因主要见于长期胃肠吸收障碍。肝脏贮存有大量维生素B₁₂，肝细胞受损伤，维生素B₁₂被释入血中，可使维生素B₁₂上升，如急性肝炎和肝坏死等。
叶酸测定 叶酸是由喋呤啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸结合而成，化学名为喋呤氨基甲酰谷氨酸，属水溶性B族维生素。叶酸测定的方法较多，化学法因既不敏感，特异性又差，故不常用。荧光法是利用叶酸经激发后，呈现荧光的特性，进行测定。微生物法较常用，其原理是利用某些微生物生长时需要叶酸的特性，由于所用菌株不同，方法也不同，粪链球菌(ACTT 8043)是用比浊法；干酪乳酸杆菌 (ACTT 7469)则是用滴定细菌产生的乳酸法。正常值各地报告相差较大。粪链球菌法血清为7～10ng/ml; 红细胞为166～640ng/ml。也可用测定尿中亚胺甲酰基谷氨酸 (FIGIU)，来间接反映血内叶酸水平。组氨酸在体内转化为亚胺甲酰基谷氨酸后，需四氢叶酸进行一碳基团的转移，才能转变为谷氨酸，叶酸缺乏时，亚胺甲酰基谷氨酸的分解代谢受阻，在体内积聚，从尿中大量排出。正常人24h排泄量<3mg，叶酸缺乏症时排泄量增加，24小时可达1000mg以上。测定血清和红细胞叶酸主要用于诊断巨幼红细胞性贫血。叶酸缺乏引起的巨幼红细胞性贫血的血清中叶酸多低于2ng/ml，红细胞叶酸低于100ng/ml。体对叶酸需要量每日约50～100μg，一般体内贮量约可供3～4个月用。但稳定性差，故营养不良性巨幼红细胞性贫血主要为叶酸缺乏引起。
维生素C测定 维生素C是己糖衍生物，又称抗坏血酸，还原性强。在血中有还原型和氧化型两种维生素C，其中大部分为还原型，易被氧化剂氧化失去生理活性，在酸性水溶液中较稳定，在中性及碱性水溶液中则极不稳定。有微量重金属离子，如Cu⁺⁺、Fe⁺⁺等存在时，更易被氧化分解。人体不能合成和贮存维生素C，摄入过多，可较快从肾脏排出。肾脏排泄阈值与其血中饱和度有关，正常饱和度为1～2mg/dl，低于0.2mg时尿中无维生素C排出。若食物中供给不足，易发生维生素C缺乏。常用的测定方法有： 2,6-二氯靛酚法，是利用维生素C使2,6-二氯靛酚还原脱色，用标准2,6-二氯靛酚滴定，或根据2,6-二氯靛酚褪色进行比色，求出维生素C含量，此法仅能测定还原型维生素C; 2,4-二硝基苯肼比色法可用以测量维生素C总量，此法是先将维生素C氧化成脱氢维生素C，然后与2,4-二硝基苯肼作用，生成2,4-二硝基苯腙，在强酸和硫脲作用下，呈红色，比色测定。正常值血清、血浆为0.5～1.4mg/dl，全血0.7～2mg/dl，测定全血维生素C较测定血清、血浆维生素C更能反映机体营养状态。血中维生素C浓度与摄入量成正比。血清<0.2mg/dl为明显降低。血中维生素C降低，主要见于坏血病，胃肠系统疾病引起的吸收障碍及服用水杨酸制剂等。尿中维生素C排泄量，波动较大，而且只能反映当时的摄入情况，并不能完全显示是否缺乏和人体的营养状况。一般尿中24h排出量约为20～30mg。