淋巴细胞毒试验
淋巴细胞毒试验是检测淋巴细胞抗原型别的一种方法。基本原理是细胞毒抗体与淋巴细胞抗原反应,在补体参与下,将淋巴细胞杀死,细胞膜受损而渗透性增加,以致染料渗入而使细胞着色。未受细胞毒抗体影响的活细胞不着色。
试验在特制的塑料反应盒(HLA反应盘)内进行,盒内装有石腊油。反应孔中加入患者(受体)的血清或HLA分型用的标准抗血清1~2μl,再加入等体积的、每μl含有1,500~2,000个供体的或待检的淋巴细胞的悬液,轻轻摇匀,在室温中致敏30min。每孔加入补体血清5μl,摇匀后,在室温中放置1h,每孔再加入2%锥蓝5μl,在室温静置20min。阴性对照用AB型血清,阳性对照用抗淋巴细胞血清,操作同上。吸弃上层染料,用低倍镜检。死细胞形态稍大,染成蓝色,无折光性。活细胞不着色,大小正常,有折光性。着色细胞<20%为阴性,20~50%为弱阳性,50~70%为阳性,>70%为强阳性。抗原抗体与补体作用后,亦可加5%伊红3μl,2min后再加中性甲醛5μl固定1~2h,吸弃上清液,在倒置显微镜下计数。
淋巴细胞毒试验是组织相容性抗原检查(HLA-A、B、C、D、DR位点)最常用的方法。同种异体间组织和器官移植能否成功,决定于供、受体两者的组织抗原是否相容。移植前尽可能选择与受体组织相容性最适合的供体。避免排异反应。HLA与某些疾病有一定的关系,如强直性脊柱炎病人多有B27。检测这些疾病的组织型,对研究遗传因素有一定价值。淋巴细胞毒试验亦可用于测定致敏淋巴细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤能力。