免疫电泳技术

带电的物质如氨基酸、多肽、核酸、蛋白质等在电场的作用下向着带相反电荷的电极移动的作用叫电泳。利用电泳现象以达到某些化学组分的分离鉴定的技术称为电泳技术。由于电泳技术具有快速、准确、容易重复等特点，已广泛地应用于生物化学、药物化学及免疫学等方面。
区带电泳是在电泳支持物上进行的，根据支持物的不同而命名，如醋酸纤维膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
免疫电泳技术系将区带电泳与免疫扩散技术结合而发展起来的。这种方法具有很高的灵敏度及分辨力，而且特异性强，样品需要量很少，操作也不复杂，因而在许多学科中广泛地应用。在免疫学中可用于对抗原或抗体进行定性和定量分析。免疫电泳技术发展很快，常根据电泳的泳动方向或电泳图型而命名，如火箭电泳、交叉免疫电泳、对流免疫电泳等。
醋酸纤维膜电泳 利用醋酸纤维膜作为支持物，进行区带电泳分离血清蛋白。醋酸纤维膜是由纯化的醋酸纤维素构成，呈均匀的泡沫样薄膜结构，经处理后，呈透明状，便于观察各区带组分。血清蛋白经醋酸纤维膜电泳后，大多数正常人血清可分为5条区带，即白蛋白、球蛋白α1、α2、β、γ。本法优点为微量、快速，区带清晰无吸附现象。根据人体五类免疫球蛋白在电泳谱上迁移的位置，分析在病理状态下，各组分蛋白呈现出异常或多组分变化。
聚丙烯酰胺凝胶电泳 丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化剂（如过硫酸铵等）的作用下聚合成大分子凝胶。在直流电场作用下，样品通过浓缩胶时，被浓缩呈很窄的带，经过分离胶时，按样品中各组分的分子大小和电荷量的不同而被分开。这种电泳由于有浓缩效应、分子筛效应和电荷效应，具有分辨力高、样品用量少的特点，且设备要求简单，操作简便。因此已被广泛用于测定抗原、抗体的纯度，提取小量抗原成分，以及检查血清蛋白成分等。用本法检查血清可测出20～30条带，因此对检测抗体纯度极为有利，并可给以定位。

免疫电泳示意图
上：在含电解质的凝胶板中将待测蛋白质点样；中： 电泳后使其分散； 下：然后在其附近的槽中加入抗血清，在一定条件下使其扩散，比例合适时即出现清晰的沉淀线。

凝胶免疫电泳 是一种凝胶电泳和凝胶免疫扩散相结合的技术。先在含电解质的凝胶中将检测的蛋白质类样品利用电泳方法分成几个组分，然后在与电泳方向平行的一侧或二侧槽内滴加单价或多价抗血清，在一定温度和湿度下扩散，形成各种不同的沉淀弧。根据各类蛋白的迁移位置以及抗原抗体的特异性结合，可用于各类蛋白的定性分析以及提取样品或抗血清纯度等的鉴定。

火箭电泳示意图
样品在含抗体的凝胶板中点样后，进行电泳，抗原向阳极运动，比例合适时出现锥形沉淀峰，形似火箭。

火箭电泳 是一种凝胶扩散和电泳结合的技术。用以定量测定混合蛋白（如血清）中某一蛋白。先将已知抗体（单价抗血清）均匀地混和在含电解质的琼脂凝胶中，然后在已打好的孔中加入待测样品和不同稀释度的工作标准（即抗原）。在电场作用下，抗原在凝胶板中向阳极泳动，比例合适时，经4～6小时泳动后出现锥形沉淀峰，形似火箭，故名。沉淀峰的高度或面积与抗原含量成正比。根据不同浓度工作标准的沉淀峰绘制标准曲线，按检测样品峰的高度或面积从标准曲线中查出其含量。
如将抗原混入琼脂凝胶中，加样孔内滴加抗体，进行电泳。因抗原所带阴电荷远远多于抗体，所以泳向阳极，而抗体虽带阴电荷但因电渗的作用而向阴极泳动，形成火箭峰，此称为反向火箭电泳。抗体之所以向阴极移动，是因为抗体在介质中所带阴电荷少，向阳极移动缓慢，而支持物带有较多的SO=⁴等负离子，水被电离带阳电，向阴极移动，抗体因而被动地被推向阴极，这就是所谓的电渗作用。

交叉免疫电泳示意图
上：蛋白抗原在凝胶板上点样后进行区带电泳；中：然后在其一侧铺上含对应抗血清的凝胶板； 下： 再在垂直方向进行火箭电泳，使抗原蛋白各区带在其第二次电泳时与凝胶板上的对应抗体各自形成独立的火箭峰。

交叉免疫电泳 是一种免疫电泳和火箭电泳结合的技术。用以检测抗原、抗体或其他蛋白质。先将抗原在凝胶板中进行区带电泳。然后在电泳后的凝胶板一侧倾倒含多价抗体或抗血清的凝胶，铺成与前者厚薄相当的均匀的凝胶板，再进行与原电泳方向垂直的火箭电泳。使抗原蛋白各区带在第二次电泳时与凝胶板中的相应抗体各自形成独立的火箭峰。这个方法较凝胶免疫电泳更易观察各个蛋白组分并有利于比较，既能用于定性也能用于半定量测定。缺点是抗血清用量较大。
对流免疫电泳 是新近发展起来的一种免疫测定技术。实际上是一种加速的双向免疫扩散 (参见 “沉淀反应”)。在凝胶板两侧打孔，分别加入抗原和抗体样品，在电场的作用下，由于电渗原理，使琼脂(注意，一般不用琼脂糖)凝胶板中的抗体向阴极方向泳动，同时在电场作用下抗原向阳极方向泳动，形成对流，故名。一般用于对流免疫电泳示意图.

在凝胶板上点样后，在电场作用下，抗原向阳极方向移动，抗体由于电渗的作用向阴极运动，在比例合适时可形成沉淀线。
各类蛋白的定性和半定量测定。特点是较双向免疫扩散敏感性高且所需时间也短。