光度法技术

光度法技术是利用物质光学吸收特性定量测定物质组分及含量的方法，常用的有比色法、分光光度法、荧光法、浊度法和原子吸收光度法等。
比色法 比色法是利用有色物质对特定波长光的吸收特性来进行定量分析的一种方法，它根据溶液在化学反应后因颜色深浅不同而对光吸收强弱不同的原理，测定被测物质的含量，在临床生化分析中应用最为广泛。早期比色法用目测，将未知溶液和已知标准溶液比较而进行比色。以后出现了光电比色法，用专门设计的光电比色计比色。
光电比色计一般由光源、滤色片、比色器、光电元件和显示器等部分组成，有些光电比色计分为测量光路和参比光路两个对应光路，其参比光路比色器中放有不含待测组分的液体。光源可采用钨丝灯或卤素灯发出连续光谱的可见光。光路中设置光阑或狭缝，以调节光的强度。滤色片的作用是从光源发出的连续光谱的光束中选出所需波长的单色光，一般多为有色玻璃或干涉滤色体，后者单色性优于前者。比色皿用以盛放被测溶液，其透光面必须无色透明，表面光滑，能透过不同波长的光。光电元件的作用是将透过溶液的光转换为电信号，常采用光电池及光电管。光电元件产生的电流应与照射光强成线性关系，该电流经放大后供显示用。显示器的功能是将放大器输出的电流用表头或数码方式显示。参比光路的目的是为抵消各种背景信号对测量造成的影响，以测量物质的实际浓度。随着仪器的发展，测量波长范围从可见光区扩展到紫外光区，光电比色计功能不断扩大。光电比色法灵敏度高，准确，操作简单。比色技术应用微机及自动化结构后，可连续测量多个样品，直接显示（或打印）出浓度值。
分光光度法 依据比尔定律测定物质对某一区域不同波长光的吸收程度，进而测出溶液中该物质的吸收光谱或浓度的方法，称为分光光度法，所采用的仪器称为分光光度计。由于所用的光单色性好，波长范围宽且连续可变，故测量灵敏度与准确性高，选择性好，使用方便，在生化分析中广泛采用。比尔定律（光吸收定律）是比色法的理论基础，被表述为： 在单色光条件下，溶液对光吸收程度与溶液浓度(C)和溶液厚度(l)成正比， 即Cl，式中称为光吸收度，又称为光密度或消光度，常以A表示，;K为消光系数，对特定波长及被测物质，K是一常数；I/I0称为透光度，又称透光率，以
荧光法 利用某些物质在紫外光照射下能发射出波长大于照射波长的光（即荧光）的特性，通过测量发射的荧光波长及强度对物质进行定性或定量分析的方法称为荧光法，所采用的仪器称为荧光光度计。这种方法特异性强，重复性好，灵敏度高，操作快速。该法的缺点是，仅适用于能产生荧光或经化学反应后能产生荧光的物质，其应用范围受到限制，并且对溶剂及试剂纯度要求严格，对温度有强烈依赖关系。
浊度法 依据悬浮溶液中颗粒对光线的散射特性测定待测组分的含量的方法，称为浊度法，用于测量有悬浮物质的溶液。测定轻度混浊溶液多采用浊度计； 测量明显混浊溶液多采用比色计。由于混浊溶液中颗粒大小的一致性差，故浊度测量的误差较大，重复性欠佳。
原子吸收光度法 利用各种元素的物质在受外来能量激发而变为原子状态时能吸收特定波长的光的特性，通过测量吸收波长值及吸收程度来检测某元素及其含量，这种方法称为原子吸收光度法，所用的测量仪器称为原子吸收分光光度计。此法的优点是选择性及准确性好，灵敏度高； 缺点是原子化条件不易控制，仪器中的光源灯需随不同测定元素而更换。该法适用于金属元素的检测。