血浆胆固醇总量的测定

---

利用胆固醇在10℃以上时易溶于无水乙醇的性质，可将血浆中的胆固醇全部抽提出来。

乙醇还可使蛋白质变性沉淀，从而破坏胆固醇与蛋白质的结合，有利于胆固醇的提取，

提取液中加入硫铁磷试剂，胆固醇可与浓硫酸及三价铁作用，生成稳定的紫红色物质，即可进行比色测定。

试剂

(1)显色剂

原液：称三氯化铁(FeCl₃·6H₂O)2．5克溶于81%浓磷酸中，并加浓磷酸至100毫升。棕色瓶内贮存。

应用液：取原液8毫升，加浓硫酸至100毫升，室温可保存6～8周。

(2)浓硫酸(分析纯)。

(3)无水乙醇(分析纯)。

(4)胆固醇标准液。

原液：准确称干燥胆固醇100毫克，置小烧杯内，加无水乙醇并稍加温使其溶解，冷至室温用无水乙醇定容至100毫升容量瓶中。置棕色瓶中，冰箱保存(此液1毫升含胆固醇1毫克)。

应用液：取原液4毫升置100毫升容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度。再加蒸馏水2毫升，贮于棕色瓶中(此液1毫升含胆固醇0．0392毫克)。

操作步骤

(1)准确取血清0．05毫升，置小试管内，加无水乙醇2．5毫升，用力振摇10秒钟，放置5分钟再摇匀，2500转／分离心10分钟。其上清液即为提取液。

(2)取3支大试管，标记为空白管，标准管和样品管。

于空白管中加无水乙醇2毫升。标准管中加胆固醇标准应用液2毫升。样品管中加样品提取液2毫升。然后3支管分别各加入显色剂2毫升(注意：加显色剂时应缓慢沿管壁加入)。

立即振摇10～15秒钟，室温中静置15分钟，然后在550nm波长处，以空白管调零，测定其光密度．

(3)计算：