维生素K的测定方法

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化学名：2－甲基－3－(3，7，11，15－四甲基－2－十六碳烯基)－1，4－萘二酮的反式和顺式异构体的混合物。维生素K1，植物甲萘醌

结构式：VitK1

分子式：C₃₁H₄₆O₂

相对分子质量：450．71

一、维生素K₁的鉴别

(1)取本品1滴，加甲醇10mL与5%氢氧化钾的甲醇溶液1mL，振摇，溶液呈绿色；置热水浴中即变成深紫色；放置后，显红棕色。

(2)本品在含量测定项下所得色谱图中的保留时间，应与对照品的保留时间一致。

(3)取本品，加三甲基戊烷制成每1mL中含10μg的溶液，照分光光度法测定，在243nm、249nm、261nm与270nm的波长处有最大吸收；在228nm、246nm、254nm与266nm的波长处有最小吸收；吸收度254nm与吸收度249nm的比值应为0．70～0．75。

二、维生素K₁含量测定(避光操作)

1．色谱条件与系统适用性试验

用硅胶为填充剂，石油醚(60～90℃)－正戊醇(2000∶2．5)为流动相，检测波长为254nm。维生素K1的顺、反式异构体峰之间及顺式异构体峰与内标物质峰之间的分离度应符合要求。

2．内标溶液的制备

取苯甲酸胆甾酯约37．5mg，置25mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度、摇匀，即得。

3．测定法

取维生素K1对照品约20mg，精密称定，置50mL量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液5mL与内标溶液1mL置10mL量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取本品适量，同法测定，按内标法以顺、反式异构体峰面积之和计算，即得。

三、食品中维生素K的测定

见本章第十六节高压液相色谱法同时测定食品中维生素A、维生素D、维生素E和维生素K。