牛细小病毒

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又称为血吸附肠道病毒。牛是唯一已知的易感宿主。主要引起犊牛腹泻，可能还与牛的流产等有关。

一、样品采集

粪便、肠刮取物、肠系膜淋巴结是病毒分离最适样品，其次是胎儿组织和血液。

二、病毒分离

主要应用原代或继代牛胎肾、睾丸或脾的细胞培养。

1．宜在细胞尚未长成单层时进行接种。

2．通常在接种后3～4天细胞出现类似于猪细小病毒的CPE。

3．在接种后18～24h常有嗜酸性核内包涵体出现。

4．宜用10%羔羊血清代替犊牛血清，因为牛血清中常存在牛细小病毒、轮状病毒等的抑制物。

三、血清学试验

(一)HA和HI试验 牛细小病毒可凝集豚鼠、人O型和狗的红细胞。用豚鼠红细胞效果较好。材料在室温下孵育1h后记录结果。

试验基本如前所述。血清滴度等于或高于1∶20时可视为阳性。血清先用25%高岭土再用50%豚鼠红细胞吸收，以除去非特异性抑制物和凝集物。

(二)中和试验 类似于猪细小病毒中所述。接种后5～12天检查牛睾丸细胞的病变情况，判定结果。微量中和试验在微量细胞培养板上进行。步骤如下。

1．血清样品在微量板上作4倍连续稀释。

2．加等量(25μl)病毒悬液(含100TCID₅₀)，37℃感作1h。

3．每孔加50μl牛胎脾细胞(6×10⁵细胞／ml)，将板置于CO₂培养箱内，37℃培养7天。

4．判定标准：不出现细胞病变孔的最高血清稀释度的倒数即为中和终点。

(三)琼扩试验 试验方法可参照猪细小病毒。当感染的单层细胞尚未出现明显病变时，将细胞刮下，低速离心后，用少量PBS悬浮细胞沉淀，然后用匀浆器将细胞打碎，以1100×g离心10min。将沉淀的细胞核悬浮，再用超声波处理数次，每次约30s，以释出核内病毒。将悬液以1500×g离心15min，取上清液对0．2mol／L碳酸钠—碳酸氢钠缓冲液(pH10．5)透析3h(以破坏病毒子结构)，即可用于本试验。