海藻酸钠和海藻酸丙二醇酯

---

化学名：海藻酸钠

结构式：

分子式：(C₆H₇O₆Na)_n

相对分子质量：结构单位：理论值198．11，平均真实值222．00

大分子：32000～250000

一、海藻酸钠的鉴别

1．试剂和溶液

1．1 氯化钙 分析纯，5%溶液。

1．2 硫酸 分析纯，10%溶液，57mL硫酸加至100mL水中，冷后加水稀释至1000mL。

1．3 萘间苯二酚 分析纯，1%乙醇溶液。

1．4 盐酸 分析纯。

1．5 异丙醚 分析纯。

1．6 醋酸氧铀钴溶液 取8g醋酸氧铀，加6g冰乙酸与适量水使成100mL，另取40g乙酸亚钴，加6g冰乙酸与适量蒸馏水使成100mL，将两液各加热至约75℃溶解后，混合放冷，并在20℃放置2h，使过量的盐类析出，用干燥滤纸过滤，即得。

2．操作步骤

2．1 取5mL试样(1：100)水溶液，加1mL5%氯化钙溶液，立即生成胶状沉淀。

2．2 取10mL试样(1：100)水溶液，加1mL10%硫酸溶液，有胶状沉淀产生。

2．3 取5mg试样于试管中，加5mL蒸馏水，1mL新配制的1%萘间苯二酚乙醇溶液，5mL盐酸煮至沸腾，并微沸3min，冷至15℃，将内容物用5mL蒸馏水洗入30mL分液漏斗中，用15mL异丙醚提取，提取液的紫色应比试剂空白提取液深。

2．4 取5mg试样灰化，灰分溶于盐酸过滤，滤液加醋酸氧铀钴溶液，搅拌数分钟，即渐渐析出金黄色沉淀。

二、海藻酸钠的定量

按二氧化碳测定法(脱羧法)测定。每毫升0．25mol／LNaOH相当于5．5mg二氧化碳(CO₂)或27．75mg海藻酸钠(干基计)。

化学名：海藻酸丙二醇酯

结构式：

计算当量：234．21

三、海藻酸丙二醇酯的鉴别

1．试剂和溶液

1．1 乙酸铅 100g／L溶液。

1．2 氢氧化钠 100g／L溶液。

1．3 硫酸 50g／L溶液。

2．试验溶液的制备

称取1g试样，加100mL水搅拌溶解，使成糊状胶液作为试验溶液。

3．操作步骤

3．1 取5mL试验溶液(2中)，加5mL乙酸铅试液(1．1)，应立即凝固成糊状。

3．2 取10mL试验溶液(2中)，加1mL氢氧化钠溶液(1．2)，在水浴中加热5～6min，冷却后加1mL硫酸(1．3)，加4mL水，激烈摇混时则持续产生气泡。

四、海藻酸丙二醇酯的定量

按二氧化碳测定法(脱羧法)测定，每毫升0．25mol／LNaOH溶液相当于CO₂5．5mg。

五、食品中海藻酸钠和海藻酸丙二醇酯的含量测定

1．原理

食品中的海藻酸钠和海藻酸丙二醇酯，用气相色谱法测定加水分解生成的丙二醇(分析方法A)，再用间萘二酚比色法定量构成藻酸的糖醛酸(分析方法B)。丙二醇的量乘以相对分子质量比，求出海藻酸丙二醇酯的量，再根据此量与总藻酸量之差，求出海藻酸钠含量。

2．试剂和溶液

2．1 正戊醇 特级。

2．2 酶溶液 分别取500mg蛋白酶及500mg果胶酶，加水溶解成10mL(现用现配)。

2．3 四氢呋喃 特级。

2．4 丙撑二醇 特级。

2．5 间萘二酚 特级。

2．6 间萘二酚溶液 取0．1g间萘二酚，加50mL水溶解，在约37℃恒温箱中放置24h，过滤，放冷处保存。在4～5日内使用。

2．7 蛋白酶。

2．8 果胶酶。

2．9 99．5%(体积分数)乙醇 特级。

3．样品溶液的制备

准确称量10g样品，放入50mL具塞离心管中，在沸水浴中加热振摇5min，冷却至50℃以下，然后加入40mL四氢呋喃，加盖充分振摇，离心分离(5min，2000r／min)，弃去上清液，将残渣中的四氢呋喃加温通入氮气，尽可能将其除尽。加水10mL，把离心管浸入约60℃的超声波浴槽中，用玻璃棒搅拌使残渣完全溶解或混悬。加1mL酶溶液振摇混匀，在37℃恒温水浴槽中放置2～3h，再于沸水浴中加热10min后冷却，用水定量移入纤维素透析袋内，浸于1000mL水中，于15～25℃透析12～16h。再将透析袋内液用水定量转移到150mL离心管中，加2mL2mol／LNaOH，在沸水浴中加热10min，冷却后用1mol／LHCl中和，加4倍量的四氢呋喃振摇混合，离心分离(5min，2000r／min)，将上清液用倾泻法转入浓缩器中，减压浓缩至近干。残渣用(1→2)甲醇溶解，准确成100mL，作为测定丙二醇的样品溶液。用分析方法A测定。向残渣中再加30～40mL无水乙醇，离心分离(5min，2000r／min)，弃去上清液，再向残渣中加入5mL预先冷却至0℃的80%硫酸溶液，用琉璃棒研磨，并在室温中放置60～90min，使之完全溶解，向此液中加冰水，准确成200mL，作为总藻酸钠测定用样品溶液。用分析方法B测定。

4．分析方法A(海藻酸丙二醇酯的测定)

4．1 标准液的制备 准确称取100mg丙二醇，用(1→2)甲醇溶解，准确成100mL，取此液10mL，用(1→2)甲醇溶液准确稀释到100mL，作为标准液(1mL相当于丙二醇100μg)。

分别吸取标准液0．5mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，加(1→2)甲醇溶液准确成5mL，作为标准曲线用标准液(1mL分别相当于丙二醇10μg，20μg，40μg，60μg，80μg，100μg)。

4．2 内标溶液的制备 准确称量500mg丙撑二醇，加(1→2)甲醇溶液准确成100mL，取此液10mL，加(1→2)甲醇溶液准确成100mL，此液作为内标溶液。

4．3 测定方法。

4．3．1 测定条件：用具有氢火焰检测器的气相色谱仪(FID-GC)按下述条件测定。

填充剂：60～80目多孔聚合微珠；

色谱柱：玻璃管内径3mm，长2m；

柱温：170～200℃的一定温度；

进样口温度：250℃；

载气：氮气，调节柱温和流速，使丙撑二醇峰在7min后出现即可。

4．3．2 标准曲线：分别取标准曲线用标准液各5mL，向其中各加0．5mL内标溶液振摇。然后分别各取2μL注入气相色谱仪，以峰高绘制标准曲线。

4．4 分析结果的表述 准确取2mL丙二醇测定用样品溶液，加(1→2)甲醇溶液至5mL，作为测定液，并向其中加入0．5mL内标溶液混匀。取2μL注入气相色谱仪中，以所得峰高从标准曲线上求出样品溶液中丙二醇的浓度(μg／mL)，按式(12－2)计算出样品中海藻酸丙二醇酯质量分数(w)。

式中 ρ——样品溶液中丙二醇浓度，μg／mL

m——取样量，g

3．08——海藻酸丙二醇酯的单体甘露糖醛酸丙二醇酯(相对分子质量234)与丙二醇(相对分子质量76)的相对分子质量比，假定藻酸100%酯化而计算其含量

5．分析方法B(海藻酸钠的测定)

5．1 标准液的制备 准确称量100mg海藻酸钠，加入5mL80%预先冷至0℃的硫酸，用玻璃棒搅拌磨碎，并在室温中放置60min使其溶解，向此液中加冰水准确成200mL，作为标准液(此液1mL相当于海藻酸钠500μg)。

准确吸取标准液0．5mL、1．0mL、2．0mL、4．0mL、5．0mL，分别加水成50mL，作为标准曲线用标准液(1mL分别相当于海藻酸钠5μg，10μg，20μg，40μg，50μg)。

5．2 测定方法。

5．2．1 测定条件：用分光光度计，在波长580nm处测定吸光度。

5．2．2 测定：准确吸取2mL总藻酸钠测定用样品溶液，加入25mL具塞比色管中，加入2mL间萘二酚及2mL盐酸，振摇混合。将此液在沸水浴中加热45min，再于冰水中冷却10min，向此溶液中准确加入10mL(5∶1)乙醚·正戊醇混合液，加盖，激烈振摇混合30～60s，分取乙醚·正戊醇层。同时用2mL水代替总藻酸钠测定用样品溶液，以同样操作所得的乙醚·正戊醇层作为参比，在波长580nm处测定吸光度。

5．2．3 标准曲线：取标准曲线用标准液各2mL，分别加入25mL具塞比色管中，以下按5．2．2同一方法操作，测定吸光度，绘制成标准曲线。

5．2．4 分析结果的表述：根据总藻酸钠测定用样品溶液测得的吸光度，从标准曲线上求出海藻酸钠的浓度(μg／mL)，按式(12－3)计算出样品中总藻酸钠质量分数(w)。

式中 ρ——总藻酸钠测定用样品溶液中海藻酸钠浓度，μg／mL

m——取样量，g

海藻酸钠含量是从总藻酸钠含量中减去由海藻酸丙二醇酯而来的海藻酸钠的量而求得。

海藻酸钠含量(%)=总藻酸钠(%)－海藻酸丙二醇酯含量(%)×0．85 (12－4)

式中 0．85——海藻酸钠的单体甘露糖醛酸钠(相对分子质量198)和海藻酸丙二醇酯的单体甘露糖醛酸丙二醇酯(相对分子质量234)的相对分子质量比