栀子黄

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别名：藏花素

结构式：

分子式：C₄₄H₆₄O₂₄

相对分子质量：976．966

一、栀子黄的鉴别

(1)本品水溶液最大吸收峰波长为440nm。

(2)取0．5g本品，加入2mL浓硫酸，着色剂溶液即由深青色慢慢变为紫色，然后变为褐色。

(3)微晶纤维素薄层层析，流动相为异丙醇∶丙酮∶水=5∶6∶5，有两个斑点：

藏花素：Rf=0．6

藏花酸：Rf=0．9

二、食品中栀子黄的测定

Determination of Crocin in Foods

(一)第一法 高效液相色谱法

1．原理

样品中栀子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量，栀子甙是栀子黄的主要成分，为对照品。

2．试剂和溶液

试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2．1 甲醇。

2．2 石油醚 60～90℃。

2．3 乙酸乙酯。

2．4 三氯甲烷。

2．5 姜黄着色剂。

2．6 栀子苷。

2．7 栀子苷标准溶液 称取2．75mg栀子苷标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至100mL混匀。即得27．5μg／mL栀子苷。

2．8 栀子苷标准使用液 分别吸取栀子苷标准溶液0，2．0mL，4．0mL，6．0mL，8．0mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至10mL，即得0，5．5μg／mL，11．0μg／mL，16．5μg／mL，22．0μg／mL的栀子苷标准系列溶液。

3．仪器

3．1 小型粉碎机。

3．2 恒温水浴。

3．3 高效液相色谱系统 Water’s M510泵，U6K进样器，岛津RF－535荧光检测器，Bluechip／PC计算机和Baseline 810色谱控制程序。

4．测定方法

4．1 样品处理。

4．1．1 饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜0．45μm过滤，滤液备作HPLC分析用。

4．1．2 酒：样品通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。

4．1．3 糕点：称取10g样品放入100mL的圆底烧瓶中，用50mL石油醚加热回流30min，置室温。用砂芯漏斗过滤，石油醚洗涤残渣5次，洗液并入滤液中，减压浓缩石油醚提取液，残渣放入通风橱至无石油醚味。用甲醇提取3～5次，每次30mL，直至提取液无栀子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。

4．2 测定。

4．2．1 HPLC参考条件如下：

色谱柱：粒度5μmODSC₁₈150mm×4．6mm；

流动相：甲醇+水(35+65)；

流速：0．8mL／min；

波长：240nm。

4．2．2 标准曲线：在本实验条件下，分别注入栀子苷标准使用液0，2μL，4μL，6μL，8μL，进行HPLC分析，然后以峰高对栀子苷浓度作标准曲线。

4．2．3 样品测定：在实验条件下，注入5μL4．1项下的样品处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，测得样品中栀子苷含量。

5．分析结果的表述

计算 按式(5－12)计算：

式中 x——样品中栀子黄着色剂的含量，g／kg

m₁——进样液中栀子苷的含量，μg

V——样品制备液体积，mL

m——样品质量，g

说明：本方法栀子苷的检测限为3．2μg／mL，栀子黄着色剂浓度在0．2～0．3g／kg范围内，饮料、酒、蛋糕回收率分别为94．1%，92%，91．3%。相对标准差(R．S．D)：2．69%，4．70%，3．20%。

(二)第二法 薄层色谱法

1．原理

样品中栀子黄着色剂用有机溶剂提取，并经过净化处理，去除干扰物质，浓缩点样展开后，在UV254nm灯下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概略定量。

2．试剂和溶液

所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2．1 甲醇。

2．2 乙醇。

2．3 乙酸乙酯。

2．4 丙酮。

2．5 甲酸。

2．6 三氯甲烷。

2．7 硅胶GF254 薄层色谱用。

2．8 展开剂 乙酸乙酯+丙酮+甲醇+水(5+5+1+1)。

2．9 展开剂 三氯甲烷+甲醇(6+3)。

3．仪器

3．1 全玻璃浓缩器。

3．2 薄层板涂布器。

3．3 玻璃板 4cm×20cm；20cm×20cm。

3．4 层析缸。

3．5 UV254nm荧光灯。

3．6 微量注射器。

4．测定方法

4．1 样品处理 将酒、饮料、蛋糕样品处理后，进行TLC检识。见4．2．2展开结果。

4．1．1 酒：取样品100mL，减压浓缩至无酒味，然后用乙酸乙酯萃取，每次30mL，萃取3～5次，至无栀子黄颜色为止，合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味。约剩20mL为止，此液留作薄层分析用。

4．1．2 饮料：取样品100mL，用乙酸乙酯萃取，每次50mL，萃取3～5次，至无栀子黄颜色为止。合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味，约剩20mL，此液留作薄层分析用。

4．1．3 蛋糕：称取10．0g已粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干样品(用手摸已干燥即可)，加入50mL石油醚搅拌，放置片刻，弃去石油醚，如此反复处理3次，以除去脂肪，吹干后研细，放入索式提取器，用甲醇提取着色剂，直到无栀子黄着色剂为止，直至着色剂全部提完，置水浴浓缩至约5mL，此液留作薄层层析用。

4．2 测定。

4．2．1 点样：取市售硅胶GF254荧光板，离板底边2cm处点样品提取液0．5μL，板的右边点2μL栀子黄色素标准溶液。

4．2．2 展开：将4．2．1项已点好样和标准的板，用2．8，2．9展开剂展开，待栀子黄着色剂明显分开后取出，晾干，与标准斑点比较，栀子黄Rf为0．64和0．50。而姜黄着色剂为0．11和0．15。样品与标品的斑点的Rf一致，则证明样品中的着色剂为栀子黄着色剂。