旋光法测定蔗糖

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(一)适用范围及旋光法原理 本法适用于糖料作物甘蔗、甜菜等蔗糖含量的测定，因其所含糖几乎全是蔗糖。旋光法测定蔗糖的原理，是利用蔗糖分子中存在不对称碳原子，具有光学活性，可使偏振光的偏振面旋转的原理。当光的波长、温度和液层厚度一定时，溶液中蔗糖的浓度与偏振光面旋转角度成正比例，因此可用旋光计或检糖计测定蔗糖含量。

比旋〔α〕是指100ml溶液中含有100g旋光性物质，在液层厚度(即管长)1dm，温度20℃时，使通过的钠光源(波长589．3nm)偏振面所旋转的角度。各种糖类都有其特定的比旋，例如蔗糖水溶液的比旋〔α〕是+66．5，葡萄糖是+52．8，果糖是－92．0，麦芽糖是+118等。因此，当液层厚度为L分米，糖的浓度为100ml中C克时，偏振光面的旋转角度可以下式表示：

因之100ml中旋光物克数C为：

式中：K——常数(随旋光物质种类和管长不同而改变。

蔗糖的〔α〕，如将管长L固定为2dm，则K=0．75，即C=0．75α。因此用旋光仪测定样品中蔗糖时，计算如下：

国际上为统一蔗糖旋光法测定的标准，定有蔗糖的“规定当量”和特制的检糖计。规定当量通常指26g蔗糖溶于100ml水中，温度为17．5℃时的比重为1．100，把它通过2dm旋光管时的旋光度规定为100°V(或100°S)。直接刻度V值的旋光仪就称检糖计。检糖计的1°V表明相当于有0．26g蔗糖溶于100ml溶液中的浓度。若将样品称重为26g，制成糖溶液的体积为100ml时，

即每1°V表明含蔗糖1%，用此测读检糖计非常方便。

一般旋光仪(刻度360°)的度数可与检糖计(100°V)的V值互相换算。“规定当量”为26g的蔗糖溶于100ml水中，管长为2dm时的旋光角度，故

又由于1°V=0．26g蔗糖／100ml溶液，故

1°=2．8885×0．26=0．75g蔗糖／100ml溶液，所以用旋光仪测定时，

式中：α——旋光仪的角度数。

(二)试剂配制

1．饱和Na₂SO₄溶液：约165gNa₂SO₄·10H₂O溶于1L水中。

2．碱式醋酸铅溶液：称取Pb(CH₃COO)2·3H₂O60g和PbO20g，与10ml水一起研磨，将混合物转入蒸发皿中，盖上表面皿，在沸水浴上加热至原黄色变为白或紫白色，然后边搅边加水190m1，冷却后倒入瓶中澄清，过滤后密封保存。

3．1%酚酞指示剂。

(三)测定步骤

1．待测液的制备：选代表性样品，按纵横面均匀切细，放入电动捣碎机中与等量水捣成糊状物，称取52．0g糊状物(即26．0g样品)，用热水洗入100m1容量瓶。若无捣碎机，可称取切碎的混匀样品26．0g放入研钵中，加2－3g石英砂，研成糊状后，用水洗入100m1容量瓶。将容量瓶放入80℃恒温水浴中加热30min，其间摇动几次，使糖分浸出。稍冷后滴加1－5m1碱式醋酸铅溶液以沉淀蛋白质。过量Pb(OAc)₂可滴加饱和Na₂SO₄除掉。冷却后加水定容。如液面有气泡，可滴加乙醚消除。过滤，弃去初滤液20m1左右，取澄清滤液待测。

2．测定旋光度：用滤液冲洗旋光管2－3次，然后将滤液装满管中，使管口液面凸起，将活动的圆玻璃片与旋光管以垂直方向插入盖好，扭上螺帽。但不要紧得过紧，以免产生应力，影响测定结果。然后测读旋光角度α或检糖计上的0V，取3－4次测读的平均值。

(四)结果计算

式中：W——与100m1待测液相当的样品重(g)。

用检糖计测定的：蔗糖%=读得的⁰V(26g样品制成100m1待测液)