尿素酶水解法

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(一)适用范围 凡混合有尿素的复合肥料，均可选用本法进行酰胺态氮的测定。尿素酶对尿素具有选择性作用，并使其分解为二氧化碳和氨。因此可用蒸馏法定量此分解出的氨。对含有多量硼的尿素混合肥料，因硼往往有可能干扰尿素酶的作用，而不宜采用本法。各种脲—醛肥料采用本法测定时，为防止此缩合物的加水分解，故在待测液制备时要用中性缓冲溶液来浸提尿素。尿素中的缩二脲虽不为尿素酶作用，但经加热和在碱溶液中有可能要分解成氨。因此应避免长时间蒸馏和在强碱溶液中的测定过程。

(二)试剂配制

1．尿素酶 粉末状，置冰箱中保存。

2．1N盐酸。

3．液体石蜡。

4．磷酸盐缓冲溶液：称取磷酸二氢钾(KH₂PO₄)3．6g和磷酸氢二钠(Na₂HPO₄)5．68g溶解于水，稀释至1L。

5．其它试剂同本章第一节蒸馏法。

(三)测定步骤

1．待测液制备

(1)尿素肥料：取经70℃干燥4h的样品，称量0．2－0．5g(精确至0．0001g)，溶于水，在l00ml容量瓶中定容。

(2)尿素复(混)合肥料：准确称量0．2－0．5g，于100ml容量瓶中，加水至约80ml，置振荡器上振荡30min后，加水至刻度。

(3)脲—醛肥料和含此肥料的复合肥：准确称取0．2－0．5g，于100ml容量瓶中，加入20℃的磷酸缓冲溶液80ml，置振荡器上振荡30min(浸提时保持20℃)，加水至刻度，并立即用干滤纸过滤。

2．待测液测定

(1)尿素：吸取10ml于150ml开氏瓶中，加1N盐酸5－6滴(调节pH=5．6－5．8左右)，加入尿素酶0．1－0．2g，摇匀。用橡皮塞塞紧瓶口。于20－25℃室温放置1h或40－45℃烘箱(或水浴)中放置0．5h，使尿素完全分解。冷却后，加入70－80ml水，按图18-1安装于普通定氮蒸馏装置上，做好蒸馏准备后，往开氏瓶中加1g氧化镁及1ml液体石蜡，立即通气蒸馏，蒸馏完毕用0．05N硫酸标准液滴定接受液。同时可对尿素酶进行空白试验，以校正测定结果。

(2)尿素混合或复合肥料：将待测液摇匀，吸取其悬浊液10ml，于150ml开氏瓶中，以甲基红为指示剂，加入稀氢氧化钠溶液中和至红色消失(pH=5．6－5．8)。即可加入尿素酶0．1－0．2g，按上述方法进行尿素水解及蒸馏测定。所得结果为酰胺态氮及铵态氮总量。另外按甲醛法或蒸馏法(不经尿素酶水解)测得铵态氮量。二者之差值即为酰胺态氮量。

(3)脲—醛肥料和含此肥料的复(混)合肥：准确吸取待测液10ml于150ml开氏瓶中，以甲基红为指示剂加入稀盐酸中和至呈现橙色止(pH=5．6－5．8)，加入0．1－0．2g尿素酶，按上述方法进行尿素水解及蒸馏定氮，测得含氮总量。如肥料中有铵态氮时，可用蒸馏法测定其含氮量。二者之差即可求出酰胺态氮量。

(四)结果计算 同本节酸水解蒸馏法。本操作取用量倍数为。欲将酰胺态氮折算成含氮量为46%的尿素，可乘以其换算因数2．174，即：