天门冬酰苯丙氨酸甲酯

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结构式：

分子式：C₁₄H₁₈N₂O₅

相对分子质量：294．31

一、天门冬酰苯丙氨酸甲酯的鉴别

1．试剂和溶液

1．1 茚满三酮。

1．2 二甲基亚砜。

1．3 茚满定。

1．4 4mol／L醋酸锂缓冲液(pH9)。

1．5 甲醇。

1．6 5mol／L氢氧化钾—甲醇溶液。

1．7 氯化铁试液 取氯化铁(FeCl₃·6H₂O)9g，溶于水并定容至100mL。

2．操作步骤

2．1 氨基试验 取茚满三酮2g，溶于75mL二甲基亚砜中，加茚满定62g，用4mol／L醋酸锂缓冲溶液(pH9)稀释至100mL，过滤，备用。取试样约10mg，放于试管中，加上述试液2mL，加热。形成紫红色。

2．2 醋基试验 取试样约20mg，溶于1mL甲醇中，加入用盐酸羟胺饱和的甲醇0．5mL，混匀后加入5mol／L的氢氧化钾甲醇液0．3mL。将混合物加热至沸，放冷。用盐酸调pH1～1．5，再加氯化铁试液0．1mL，应产生白树脂布尔戈尼色样(burgundy color)色。

二、天门冬酰苯丙氨酸甲酯的含量测定

1．试剂和溶液

1．1 甲酸。

1．2 乙酸。

1．3 0．1mol／LHClO₄标准溶液。

1．4 α－萘酚苯甲醇溶液。

2．测定方法

准确称取本品0．3g，加甲酸3mL将其溶解，加乙酸50mL，立即用0．1mol／LHClO₄标准液滴定(指示剂为α－萘酚苯甲醇试液0．5mL)。溶液的褐色变成绿色时为终点。另外进行空白试验校正，再进行干燥品的换算。

0．1mol／LHClO₄1mL相当于29．431mgC₁₄H₁₈N₂O₅。

三、食品中天门冬酰苯丙氨酸的测定

1．原理

样品中天门冬酰苯丙氨酸甲酯，经用中性氧化铝固性萃取后，经高效液相反相C₁₈分离后，以保留时间定性、峰高或峰面积定量。

2．试剂和溶液

有机溶剂需重蒸。

2．1 甲醇。

2．2 乙腈。

2．3 0．02mol／L硫酸铵溶液 称取硫酸铵2．642g，加水溶解至1000mL。

2．4 10%硫酸溶液。

2．5 中性氧化铝 层析用，100～200目。

2．6 天门冬酰苯丙氨酸甲酯标准储备溶液 精密称取天门冬酰苯丙氨酸甲酯0．1000g，用移动相溶解后移入100mL容量瓶中，并用移动相稀释至刻度，即含天门冬酰苯丙氨酸甲酯1．0mg／mL。

2．7 天门冬酰苯丙氨酸甲酯标准使用液 吸取天门冬酰苯丙氨酸甲酯储备溶液2．5mL于50mL容量瓶中，加移动相至刻度，摇匀后，吸取此液1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL分别放于10．0mL容量瓶中，加移动相至刻度，即分别含天门冬酰苯丙氨酸甲酯0．005mg／mL，0．010mg／mL，0．015mg／mL，0．020mg／mL，0．025mg／mL的标准溶液。

2．8 移动相

0．02mol／L硫酸铵(740～800)+甲醇(170～150)+乙腈(90～50)+10%H₂SO₄(1mL)。

3．仪器

3．1 高效液相色谱仪。

3．2 超声清洗仪(溶剂脱气用)。

3．3 离心机。

3．4 抽滤瓶。

3．5 G3耐酸漏斗。

3．6 微孔滤膜0．45μm。

3．7 层析柱 用10mL注射器筒代替较好，内装3cm高的中性氧化铝。

4．测定方法

4．1 样品处理。

4．1．1 汽水：将样品加温，搅拌除去二氧化碳或超声脱气。吸取样品2．5mL于25mL容量瓶中。加移动相至刻度，摇匀后，溶液通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。

4．1．2 可乐型饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，吸取已除去二氧化碳的样品2．5mL，通过中性氧化铝柱，待样品液流至柱表面时，用移动相洗脱，收集25mL洗脱液，摇匀后超声脱气，此液备作HPLC分析用。

4．1．3 果茶、果汁类食品：吸取2．5mL样品加水约20mL混匀后，离心15min(4000r／min)，上清液全部转入中性氧化铝柱，待水溶液流至柱表面时，用移动相洗脱。收集洗脱液25mL，混匀后，超声脱气，此液作HPLC分析用。

4．2 测定。

4．2．1 HPLC参考条件：

分析柱：大连化物所产的Spherisorb C₁₈4．6mm×150mm，粒度5μm

移动相：0．02mol／L硫酸铵(740～800)+甲醇(170～150)+乙腈(90～50)+10%H₂SO₄(1mL)；

波长：214nm

流速：0．7mL／min。

4．2．2 标准曲线：分别进标准系列溶液(标准使用液2．7)各10mL，进行HPLC分析。然后以峰面积为纵坐标，天门冬酰苯丙氨酸甲酯的含量为横坐标，画标准曲线；或计算回归方程求出样品中天门冬酰苯丙氨酸甲酯的含量。

4．2．3 样品测定：进4．1项的样品处理后的样品溶液10μL，测定其峰面积，从标准曲线或回归方程中查得天门冬酰苯丙氨酸甲酯的量。

本方法可同时测定乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因、天门冬酰苯丙氨酸甲酯。HPLC色谱图如图11－2所示。

图11－2 HPLC色谱图

1－乙酰磺胺酸钾

2－糖精钠

3－咖啡因

4－天门冬酰苯丙氨酸甲酯

5．分析结果的表述

式中 x——样品中天门冬酰苯丙氨酸甲酯的含量，g／kg或g／L

ρ——由标准曲线查得进样液中天门冬酰苯丙氨酸甲酯的含量，mg／mL

V₁——样品稀释液总体积，mL

V₂——HPLC测定时进样的体积，mL

m——样品质量，g