培养基的制备

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一、培养基的分类

(一)按化学成分分为合成培养基和天然培养基

1．合成培养基 由已知化学成分的营养物组成的培养基。

2．天然培养基 由化学成分繁多的天然物质配制的培养基。

(二)按物理性状分为固体、半固体、液体培养基

1．液体培养基 就是没有加琼脂、明胶等固形剂的培养基。

2．固体培养基 在液体培养基中加入1．5～3%琼脂(因琼脂牌号而异)，溶化即成。

3．半固体培养基 在液体培养基中加入0．3～0．5%琼脂，溶化即成。

(三)按培养基用途分为普通培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、特殊培养基、厌氧培养基六类

1．普通培养基 含有细菌生长所需的最基本的营养成分，可供一般细菌生长繁殖。

2．营养培养基 在普通培养基中添加一些其他营养成分，可供对营养要求较高细菌的生长繁殖。

3．鉴别培养基 在培养基中加入某种特定的物质，观察细菌在培养基中生长繁殖后对该物质的分解利用情况，从而对细菌进行鉴别。

4．选择培养基 在培养基中加入某种化学物质，使其抑制某一类细菌生长，而不影响或有利于另一类细菌生长，便于将后者筛选出来。

5．特殊培养基 在培养基中加入某种特殊营养物质，或提高或降低培养基pH值，专供某类细菌的生长繁殖。

6．厌氧培养基 提供专性厌氧菌生长的环境，除将培养基放在无氧环境培养外，还可在培养基中加入还原剂，降低氧化还原电势，以利厌氧菌生长。

二、常用培养基的制备

(一)牛肉浸液(Beef infusion broth)

成分：鲜牛肉 500g

蒸馏水 1000ml

制法：

(1)取去脂肪、筋腱并绞碎的鲜牛肉500g，置容器中，加蒸馏水1000ml搅拌均匀，置4℃冰箱过夜。

(2)次日取出煮沸1h，并不断搅拌。

(3)补足失去水分，先用纱布后用滤纸过滤，必要时用鸡蛋白沉清。

(4)分装，121℃20min灭菌，冰箱保存备用．

用途：为制备多种培养基的基础。

(二)营养肉汤(Nutrient broth)

成分：牛肉浸液 1000 ml

蛋白胨 10g

氯化钠 5g

磷酸氢二钾(K₂HPO₄) 1g

制法：

(1)取定量肉浸液，加入其他各成分，加热溶解，补足失去水分。

(2)调pH为7．4～7．6。

(3)过滤分装。

(4)121℃15～20min灭菌，4℃冰箱保存备用。

用途：

(1)供一般细菌培养。

(2)制固体培养基的基础液。

(三)肉膏汤(Beef extract broth)

成分：牛肉膏 5g

蛋白胨 5g

氯化钠 5g

磷酸二氢钾 1g

蒸馏水 1000ml

制法：将上述各成分混合，加热溶解，调pH为7．4～7．6，过滤分装，121℃15～20min灭菌，4℃冰箱保存备用

用途：同营养肉汤。

(四)营养琼脂(Nutrient Agar)

成分：营养肉汤(或肉膏汤) 1000ml

琼脂 20g

制法：

(1)于1000ml普通肉汤(或肉膏汤)中加入琼脂20g，煮沸溶解，补足失去水分。

(2)以绒布或脱脂棉过滤，分装，121℃20min灭菌，4℃冰箱保存备用。

用途：一般细菌培养，菌种保存或供制备血液琼脂等培养基的基础。

(五)血液琼脂(Blood Agar)

成分：营养琼脂(pH7．4～7．6) 100ml

无菌脱纤血或抗凝血(马、羊、兔) 10ml

制法：

(1)将无菌营养琼脂100ml加热溶化，待冷至45～50℃时，以无菌操作加入无菌脱纤血或抗凝血10ml。

(2)立即轻轻振荡混匀，千万勿摇起气泡，立即无菌操作倾注灭菌平皿或分装试管并立即放置成斜面，这一操作要快，特别在冬天。待平皿或斜面凝固后，置37℃培养24h，弃去污染平皿或试管，4℃冰箱保存。

用途：用于营养要求较高细菌的分离培养，及观察细菌的溶血作用。

脱纤血制备见第三章动物试验采血法。

(六)巧克力琼脂(Chocolate agar)

成分：肉汤琼脂(pH7．6) 100ml

无菌脱纤兔血 10ml

制法：将无菌肉汤琼脂加热溶解，待冷至80～90℃时，加入脱纤兔血，摇匀，分装灭菌试管或平皿。制备好的培养基颜色同巧克力的颜色。

用途：培养嗜血杆菌等。

(七)半固体(Semisolid agar)

成分：营养肉汤(pH7．4～7．6) 100ml

琼脂 0．3～0．5g

制法：

(1)将琼脂加入肉汤中加热溶化。

(2)调pH为7．6。

(3)过滤、分装试管，121℃15～20min灭菌。4℃冰箱保存备用。

用途：用于菌种保存，细菌运动性观察。

(八)蛋白胨水(Peptone water)

成分：蛋白胨 10g

氯化钠 5g

蒸馏水 1000ml

制法：将蛋白胨、氯化钠置蒸馏水中加热溶解，调pH为7．6，分装试管，121℃15～20min灭菌，4℃冰箱保存。

用途：作靛基质试验，或糖发酵管的基础液。

(九)葡萄糖蛋白胨水(Glucose peptone water)

成分：蛋白胨 7g

葡萄糖 5g

磷酸氢二钾(K₂HPO₄) 5g

蒸馏水 1000ml

制法：将上各成分置蒸馏水中，加热溶解，调pH为7．2，分装试管，115℃15min灭菌，4℃冰箱保存。

用途：甲基红(M·R)和维培二氏(V·P)试验用。

(十)肉肝胃酶消化汤(Meat and liver digest broth)

成分：牛肝 100g

牛肉 100g

猪胃 100g

蒸馏水 1000ml

10mol／L盐酸(比重1，18～1．19) 10ml

制法：将牛肝、牛肉、猪胃去筋膜、脂肪，切碎或绞碎，各取绞碎之牛肉、牛肝、猪胃100g置1000ml蒸馏水中，再加盐酸混匀，置51～54℃水浴中消化24h。消化期间定时搅拌(前10～12h每小时搅拌1次)。消化完后，除去上层脂肪，纱布过滤，取滤液并补足失去水分。加热至80℃数分钟，使其消化停止，用10mol／L的NaOH调pH为8．2。煮沸40min，静置冷却沉淀。过滤分装，115℃40min灭菌，置4℃冰箱保存。

用途：用于对营养要求较高细菌的基础培养基。

附：在洗猪胃时，只需除去脂肪即可，不必将猪胃粘膜洗净，主要利用胃粘膜上的胃蛋白酶。

(十一)血消化汤(Blood digest broth)

成分：猪胃(去脂肪绞碎) 100g

猪血(或牛血) 100g

浓盐酸(C·P) 10ml

蒸馏水 1000ml

制法：

(1)称取绞碎的猪胃及猪血(或牛血)置玻璃瓶中混匀，加入浓盐酸及加温至50℃的蒸馏水。

(2)置52～56℃水浴中18～24h。

(3)加2mol／L的NaHCO3水溶液5ml，煮沸10min，置4℃冰箱过夜。

(4)次日取出，吸出上清液，并加蒸馏水至原量，再加热至75℃时，加2mol／LNaHCO345ml，煮沸，调pH为7．2～7．4。

(5)过滤、分装，121℃15～20min灭菌，4℃冰箱保存。

用途：为无糖基础培养基，可作为糖发酵管及肠道菌选择培养基的基础培养基。

(十二)糖发酵管(Sugar fermentation tube)

成分：蛋白胨水或血消化汤 100ml

糖(醇或甙) 0．5～1g

1．6%溴甲酚紫乙醇液 0．1ml

制法：将0．6或1g糖(醇或甙)于100m1蛋白胨水(或血消化汤)中，加热溶解，调pH为7．2，加入1．6%溴甲酚紫乙醇液0．1ml，混匀后分装试管，并在试管内倒插一发酵管，115℃15min灭菌，4℃冰箱保存。

用途：观察细菌对糖、醇、甙的发酵能力。

附注：目前有微量发酵管，微量糖发酵纸片商品出售，使用、保存方便。

(十三)厌氧肝汤(Anaerobicbroth with liver)

成分：肉汤培养基(pH7．6)

肝片

凡士林(或液体石蜡)

制法：

(1)将肉汤培养基分装试管，每管约10ml。

(2)每管加肝片1～2g。

(3)上面加入液体石蜡或溶化的凡士林2ml。

(4)121℃30 min灭菌，4℃冰箱保存。

用途：用于一般厌氧菌培养。

肝片的制法：取新鲜牛肝去筋膜，煮熟，切成小颗粒，在干烤箱中60℃烘干。

(十四)硫乙醇酸钠(巯基醋酸钠)肉汤(Thioglychollate broth)

成分：牛肉浸液(pH8．0) 100ml

硫乙醇酸钠 0．1g

琼脂 0．05g

葡萄糖 1g

0．2%亚甲蓝水溶液 0．1ml

制法：将上述成分(除亚甲蓝外)混合，加热溶解，调pH为 8．0，再加入亚甲蓝0．1ml，摇匀，滤纸过滤，分装试管，121℃20min灭菌。

用途：供厌氧菌培养或无菌检验用。

(十五)葡萄糖血清琼脂(Glucose serum agar)

成分：营养琼脂(pH7．6) 100ml

20%葡萄糖水溶液 5ml

血清(马、牛、羊) 5～10ml

制法：取无菌肉浸液琼脂加热溶化，冷至50℃左右，加入20%葡萄糖溶液(过滤除菌)和无菌血清，混匀后倾注平皿。无菌检验后4℃冰箱保存。

用途：用于分离培养布氏杆菌，梭菌等对营养要求较高的细菌。

(十六)马铃薯琼脂(Potato agar)

成分：马铃薯(去皮切碎) 250g

牛肉膏 5g

蛋白胨 10g

氯化钠 5g

葡萄糖 10g

甘油(C·P) 8ml

琼脂 15g

蒸馏水 1000ml

制法：

(1)取去皮切碎的马铃薯250g，加蒸馏水1000ml，煮沸30min，用纱布过滤，补足失去水分。

(2)将上述其他成分(除葡萄糖和琼脂外)置马铃薯浸汁中，加热溶解，补足水分。

(3)调pH为7．2，再加葡萄糖和琼脂，加热溶解，过滤，分装，121℃20min灭菌，4℃冰箱保存。

用途：用于分离培养布氏杆菌。

(十七)肝浸汤(Liver infusion broth)

成分：肝浸液 1000ml

蛋白胨 10g

氯化钠 5g

制法：

(1)肝浸液制备：取新鲜牛肝除去筋膜和脂肪，绞碎称取500g，加蒸馏水1000ml，混匀，4℃冰箱过夜，煮沸1h，过滤，补足失去水分。

(2)加蛋白胨、氯化钠于肝浸液中，加热溶解，调pH为7．0～7．2，过滤分装，121℃20min灭菌。

用途：布氏杆菌增菌培养用。

(十八)肝浸汤琼脂(Liver infusion agar)

成分：肝浸汤(pH7．2) 100ml

琼脂 2g

制法：将琼脂加入肝浸汤混合，121℃20min灭菌，冷至50℃左右倾注平皿，无菌检验后4℃冰箱保存。

用途：分离布氏杆菌。

(十九)卵黄琼脂(Egg yolk agar)

成分：营养琼脂(pH7．4) 90ml

卵黄液 10ml

制法：将无菌的营养琼脂加热溶化，冷至45℃时，加入卵黄液，混匀，倾注平皿，无菌检验后备用。

用途：用于细菌培养及卵磷脂酶试验。

卵黄液制备：将鸡蛋表面消毒后，大小头各开一小孔并破蛋壳膜，让鸡蛋白先从小孔流出，再打开蛋壳，将蛋黄置于一装有玻璃珠的无菌三角瓶中，振摇打散蛋黄即成。

(二十)乳糖卵黄牛乳琼脂(Lactose-eggyolk-milk agar)

成分：营养琼脂(pH7．6) 100ml

20%乳糖溶液(过滤除菌) 6ml

1%中性红溶液(高压灭菌) 0．3ml

卵黄盐水(1∶1)(无菌操作) 4ml

脱脂牛乳(高压灭菌) 15ml

制法：加热溶化灭菌营养琼脂，冷至50℃，加入乳糖溶液，中性红溶液，脱脂牛乳和卵黄盐水，混匀后倾注无菌平皿，无菌检验后4℃冰箱保存。

用途：用于一些厌氧梭菌的培养。

脱脂牛乳制备：将新鲜牛乳煮沸30min，置冰箱过夜，弃去上层乳脂，113℃15min灭菌。

卵黄液制备：可参考卵黄琼脂制备，不同的是取出卵黄液按1∶1与无菌生理盐水混合即成卵黄盐水。

(二十一)碳酸氢钠琼脂(Sodium bicarbonate agar)

成分：牛肉膏 5g

蛋白胨 10g

氯化钠 5g

碳酸氢钠(NaHCO₃) 5～7．5g

琼脂 20g

蒸馏水 1000ml

制法：将上述各成分(除琼脂)置蒸馏水中，加热溶解，调pH为7．4，再加入琼脂加热溶化，过滤分装，121℃15min灭菌，待冷至45℃左右，加入无菌马血清10ml，摇匀，倾注平皿，无菌检验后4℃冰箱保存。

用途：用于炭疽杆菌培养。

(二十二)谷氨酸钠葡萄糖琼脂(Sodium glutaminate glucose agar)

成分：谷氨酸钠 4g

硫酸镁 0．5g

磷酸二氢钾(KH₂PO₄) 0．5g

琼脂 20g

蒸馏水 1000ml

制法：将上述各成分(除琼脂外)混合，加热溶解，调pH为7．0，然后加琼脂，加热溶解，分装试管(每管4．5m1)，121℃20min灭菌。应用前隔水煮沸使琼脂溶化，无菌手续加10%的葡萄糖0．5ml(过滤除菌)，混匀，摆成斜面，凝固后置37℃培养24h，弃去污染管备用。

用途：用于培养分枝杆菌用。

(二十三)潘曲夫(Petroff)培养基

成分：甘油牛肉浸液 33ml

鸡蛋(全蛋) 66ml

1%龙胆紫酒精液 1ml

制法：按上述比例将三成分混合，双层纱布过滤，分装于无菌试管中，斜置于血清凝固器内，逐步升温至85～90℃经1～2h使其凝固，再用同样温度间歇灭菌3次，每天1次，每次30min，无菌检验后4℃冰箱保存。

用途：分离培养结核杆菌。

鸡蛋液制备：将鸡蛋浸于70%酒精中15～20min，取出，无菌手续打开蛋壳，取出蛋白和蛋黄置于有玻璃珠的无菌三角瓶内，振摇打碎，无菌纱布过滤。

甘油牛肉浸液：取牛肉浸液425ml，甘油75ml混合，121℃20min灭菌。

(二十四)吕氏血清斜面(Loeffler′s serum slant)

成分：10%葡萄糖肉汤(pH7．4) 1份

牛血清或人血清 1份

制法：将上述成分混合，分装试管，置血清凝固器或流动蒸气灭菌器内摆成斜面，间歇灭菌，第一天80℃1h，第二天85℃1h，第三天90℃1h，37℃过夜，弃去污染管，4℃冰箱保存备用。

用途：培养棒状杆菌等对营养要求较高细菌或供凝固血清液化试验用。

(二十五)四硫磺酸钠煌绿培养基(Tetrathionate brillient green broth)

成分：

1．基础液

蛋白胨 10g

牛肉膏 5g

氯化钠 3g

碳酸钙 4．5g

蒸馏水 1000ml

将以上各成分加入蒸馏水中，加热至70℃左右使其溶解(碳酸钙不会全溶)，调pH7．0±±0．1，121℃20min灭菌。

2．硫代硫酸钠溶液

硫代硫酸钠 50g

蒸馏水 100ml

将两成分混合，121℃20min灭菌．

3．碘液

碘片 20g

碘化钾 25g

蒸馏水 加至 100ml

将碘化钾充分溶解于少量蒸馏水中，再投入碘片，然后加蒸馏水至规定总量，振摇使碘片全部溶解为止。

4．煌绿水溶液

煌绿 0。5g

蒸馏水 100ml

以上成分混合后，放于暗处，待其自然灭菌，一般放一天后使用。

5．牛胆盐粉溶液

牛胆盐粉 10g

蒸馏水 100ml

将牛胆盐粉与蒸馏水混合，煮沸溶解，121℃20min灭菌。

制法：此培养基要用前制备。取基础液900ml，硫代硫酸钠溶液100ml，碘液20ml，煌绿溶液2ml，牛胆粉溶液50ml，均以无菌操作混入无菌容器内，每加入一种成分摇匀后再加另一种成分，分装应用。

用途：沙门氏菌增菌培养。

(二十六)亚硒酸盐胱氨酸增菌培养基(Selenite cystine broth)

成分：胰蛋白胨 5g

乳糖 4g

无水磷酸氢二钠(Na₂HPO₄) 10g

亚硒酸氢钠 4g

0．1%L-胱氨酸液 10ml

蒸馏水 1000ml

制法：

(1)除胱氨酸外，其他成分混合，加热溶解，煮沸即可。

(2)加入0．1%胱氨酸溶液6ml。(3)调pH为7．0±0．1，无菌分装应用，新鲜制备，不高压。

用途：供沙门氏菌增菌培养用。

0．1%DL-胱氨酸溶液配制：取DL-胱氨酸lg，溶于15ml1mol／lNaOH液中，再加无菌蒸馏水至1000ml即成。

(二十七)远藤氏琼脂(Endo′s agar)

成分：无糖琼脂(pH7．6) 100ml

乳糖 1g

5%碱性复红酒精液 5ml(新配制)

5%无水亚硫酸钠溶液 2．5～5ml

制法：取无糖琼脂加入乳糖1g，115℃10min灭菌，或隔水溶解琼脂后继续煮沸15～20min。趁热加入5%碱性复红酒精溶液5ml，5%无水亚硫酸钠溶液(加热煮沸)2．5～5ml，至培养基呈淡红色为止，摇匀，冷至50℃左右倾注无菌平皿。

用途：用于分离沙门氏菌和志贺氏菌等肠道致病菌。

(二十八)去氧胆酸钠枸橼酸钠琼脂(Desoxycholate citrate agar)

成分：蛋白胨 10g

乳糖 10g

无水磷酸氢二钾(K₂HPO₄) 2g

枸橼酸铁 1g

去氧胆酸钠 1g

枸橼酸钠 1g

氯化钠 5g

琼脂 15g

1%中性红水溶液 3ml

蒸馏水 1000ml

制法：将以上成分(除中性红外)混合，加热溶解，调pH为7．2，再加入中性红水溶液，分装，隔水煮沸1 min(切勿过热，因过热能增加抑制性)。待冷至50℃时倾注灭菌平皿。

用途：用于沙门氏菌、志贺氏菌分离。

(二十九)HE琼脂(Hektoen enteric agar)

成分：乳糖 12g

蔗糖 12g

水杨素 2g

胨 12g

氯化钠 5g

牛肉膏 3g

琼脂 25g

蒸馏水 000ml

3号胆盐 15g

0．4%溴麝香草酚蓝 16ml

Andrade指示剂 20ml

甲液 20ml

乙液 20ml

制法：

(1)先将琼脂在部分蒸馏水中融化。

(2)除3号胆盐外，将其他成分混合于另一部分蒸馏水中加热溶解，加入溶解的琼脂。

(3)将3号胆盐用少量蒸馏水溶解，再加入溶解的琼脂。

(4)调pH为7．3。

(5)加入溴麝香草酚蓝和Andrade指示剂，混匀，煮沸。

(6)加入甲液和乙液，煮沸后冷至50℃左右倾注平板备用。

用途：分离培养肠道致病菌用。

Andrade指示剂：称取酸性复红0．5g，溶于100ml蒸馏水中，徐徐加入1mol／LNaOH溶液至颜色退至淡棕色为止。该指示剂pH7．2时不显颜色。

甲液：硫代硫酸钠 34g

枸橼酸铁铵 4g

蒸馏水 100ml

将上述两成分置蒸馏水中加热溶解。

乙液：去氧胆酸钠 10g

蒸馏水 200ml

将去氧胆酸钠置蒸馏水中，加热溶解。

(三十)亚硫酸铋琼脂(BS)

成分：蛋白胨 10g

牛肉膏 5g

葡萄糖 5g

硫酸亚铁 0．3g

磷酸氢二钠(Na₂HPO₄) 4g

0．5%煌绿水溶液 5ml

柠檬酸铋铵 2g

亚硫酸钠 6g

琼脂 18～20g

蒸馏水 1000ml

制法：

(1)将前面5种成分溶于300ml蒸馏水中。

(2)将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50ml蒸馏水溶解。

(3)琼脂置600ml蒸馏水煮沸溶解，冷至80℃时将三液混合，补足水分至1000ml。

(4)调pH为7．5，再加0．5%煌绿水溶液5ml，冷至50～55℃左右倾注平皿备用。

用途：沙门氏菌的分离培养。

注：此培养基不需高压灭菌，制备过程不宜过分加热，以免降低选择性。应用前一天制备，贮存于室温暗处，超过48h不宜使用。

(三十一)三糖铁琼脂(Triple sugar iron agar)

成分：蛋白胨 20g

氯化钠 5g

乳糖 10g

蔗糖 10g

葡萄糖 1g

硫酸亚铁铵 0．2g

硫代硫酸钠 0．3g

0．4%酚红酒精溶液 6ml

琼脂 13g

蒸馏水 1000ml

制法：除酚红指示剂外，将其余各物混合加热溶解，调pH为7．4～7．6，再加入酚红酒精溶液，摇匀，分装试管，其量约占试管长度的一半。115℃20min灭菌，趁热放置成高层斜面，凝固后作无菌检验备用。制成的培养基为淡红色。

用途：从选择性平板上挑可疑菌落接种于此培养基上作纯培养，观察葡萄糖、乳糖、蔗糖的发酵反应，并可观察H₂S的产生。常用于肠杆菌科生化鉴定。

(三十二)马丁肉汤(Martin′s broth)

成分：猪胃消化液 1份

普通肉汤 1份

制法：取等量猪胃消化液和普通肉汤混合，煮沸10min，调pH为7．6～7．8，分装，115℃30min灭菌。

用途：用于培养猪丹毒杆菌及营养要求较高的细菌。

猪胃消化液制备：取去脂肪并绞碎的猪胃200g，加蒸馏水1000ml，浓盐酸10ml，置50～60℃水浴中消化18～24h。取出后经100℃10～20min煮沸使消化停止。放冰箱24h，弃去上浮脂肪，吸取上清液，纱布过滤。经流动蒸气消毒器中加热30～40min，调pH为8．2，过滤分装经121℃20min灭菌后备用。

(三十三)胰蛋白胨琼脂(Tryptone agar)

1．成分：胰蛋白胨 10g

磷酸氢二钠(Na₂HPO₄) 2g

酵母膏 5g

氯化钠 5g

琼脂 15～18g

蒸馏水 1000ml

制法：将以上各成分(除琼脂)混合，加热溶解，调pH为7．2～7．4，再加入琼脂，加热溶化，分装，121℃30min灭菌，冰箱保存。

用途：分离培养产气单胞菌和荧光单胞菌。

2．成分：胰蛋白胨 0．5g

酵母膏 0．5g

牛肉膏 0．2g

醋酸钠 0．2g

琼脂 20g

蒸馏水 1000ml

制法：将以上各成分(除琼脂)混合，加热溶解，调pH为7．2～7．4，再加入琼脂，加热溶化，分装，121℃30min灭菌备用。

用途：粘球菌初分离用。

(三十四)胰蛋白胨明胶(Tryptone gelatin)

成分：胰蛋白胨 5g

酵母膏 0．5g

牛肉膏 0．2g

醋酸钠 0．2g

蒸馏水 1000ml

明胶 120g

制法：将以上各成分(除明胶外)混合，加热溶解，调pH为7．2～7．4，再加入明胶，加热溶化分装，121℃15min灭菌，冰箱保存。

用途：用于明胶液化试验。

(三十五)鱼肉蛋白胨琼脂(Fish meat peptone agar)

成分：胰蛋白胨(或普通蛋白胨) 10g

氯化钠 5g

磷酸氢二钾(K₂HPO₄) 2g

酵母浸膏 10g

琼脂 20g

鱼肉汤 1000ml

制法：将以上各成分(除琼脂外)混合，加热溶解，调pH为7．2～7．4，加入琼脂，加热溶化分装，121℃30min灭菌，冰箱保存。

用途：用于多种鱼类病原菌的培养。

附：鱼肉汤的制备：取鱼肉500g，加蒸馏水1000ml，冰箱过夜，次日取出煮沸15min，过滤，补足失去水分，分装，121℃30min灭菌。