双缩脲法

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(一)适用范围 因蛋白质中肽键在碱性溶液中能与二价铜离子形成蓝紫色络合物，在一定范围内，其颜色深浅与蛋白质含量成正比。本法利用此原理直接测定样品中蛋白质含量，方法手续简便。适用样品广泛，可对一般谷物如小麦、大麦、水稻、玉米等进行测定。但准确度稍低。适用于同一作物品种间蛋白质含量的对比研究。

(二)试剂配制

1．碱性异丙醇 取氢氧化钾(粉状，二级)5．16g，溶于300ml水中，全部转移入1L容量瓶中，再加入600ml异丙醇，定容。摇匀。

2．异丙醇及粉末状碳酸铜试剂。

(三)测定步骤 称待测样品1．00±0．01g(过0．18mm筛)，放入250ml三角瓶中，加入2ml异丙醇及1．0±0．1g碳酸铜粉末，用移液管加入50ml碱性异丙醇溶液，在振荡器上强烈振荡15min。放置15min使溶液充分显色。过滤或在6000转／分下离心10min，取得清亮的溶液，在550nm波长处进行比色测定，测得吸收值。

工作曲线绘制 取与待测样品同一品种的样品30个左右(要求蛋白质含量从高到低各不相同)用开氏法测其蛋白质含量，用双缩脲法比色测其吸收值。绘制蛋白质与吸收值的工作曲线。或计算出其回归方程式。

(四)结果计算

或用待测样品的吸收值，代入回归方程而计算出其蛋白质的含量。

(五)注释 本法在一定浓度范围内(1－15mg蛋白质／10ml)所产生的紫色络合物颜色深浅与蛋白质含量成正比。显色时放置时间必须严格掌握一致。