代谢抑制试验

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霉形体在液体培养基中培养时，由于种不同，有的能够发酵葡萄糖产酸，有的能分解尿素或精氨酸产碱，有的有还原四氮唑能力，在培养基中加入相应抗血清能抑制霉形体代谢，从而可从培养基中pH指示剂或四氮唑的颜色变化来加以判定，此种代谢抑制试验已被采纳作为霉形体鉴定的方法之一，本法亦可用于抗体滴定。

一、培养基

牛心消化汤30%，Hanks液50%，灭能健康猪血清20%，25%鲜酵母浸出物2%，水解乳蛋白0．125%，青霉素500u／ml，醋酸铊0．0125%，pH7．6。

二、标准阳性血清

同生长抑制试验。

三、试验操作

用上述培养基将阳性血清按下式倍比稀释，每管1ml，各管加入用培养基10000倍稀释的待检菌液1ml，并作血清(不加菌液)对照和菌液(不加阳性血清)对照，取另一列试管用免疫前采取的健康兔血清，按上述操作，做为阴性血清对照。上述各管用无菌橡皮塞塞紧，置37℃培养，每天观察pH变化。

表9-20 代谢抑制试验术式

四、结果判定

将上述培养基用1／10N NaOH滴定成pH7．0、7．1、7．2、7．4、7．5和7．6等，分装到同样大小的试管，做成标准比色管。每天观察时，将各管与标准管对比，以确定其pH值，当菌液对照管pH降至7．1时，记录各管pH值，以pH未下降或仅下降0．1时的最高血清稀释度的倒数为该血清的抑制价。

抑制价＜16者为非猪肺炎霉形体，≥16者判为猪肺炎霉形体，标准血清对同源菌株的抑制价多在128～512，高者可达2048，可根据待检菌株与同源株的效价差异，判定其血清学关系的远近。