(6)烟叶和土壤中残留量检测方法

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中国农业科学院烟草研究所 曹爱华 徐光军 李义强 刘保安

在密闭加热条件下，代森锰锌本体与氯化亚锡-盐酸溶液反应，产生CS₂气体，气相色谱法(FPD)测定。代谢物乙撑硫脲(ETU)用甲醇提取，混合柱层析净化，液相色谱法(UV)测定。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪 火焰光度检测器(FPD)

液相色谱仪 紫外检测器(UV)

旋转式振荡器

超声波提取器

层析柱 Φ10mm×30cm

2．主要试剂

丙酮(重蒸)、甲醇(重蒸)、石油醚(重蒸)、二氯甲烷(重蒸)、乙醇(重蒸)、盐酸、重蒸馏去离子水、二硫化碳、氯化亚锡，无水硫酸钠、弗罗里硅土、硅胶

代森锰锌标准品、乙撑硫脲(ETU)标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 代森锰锌

称取0．5g干烟叶(鲜烟叶2g，土壤20g)置于反应瓶中，加30mL水和40mL氯化亚锡／5mol／L盐酸溶液，塞紧反口胶塞，用无油聚四氟乙烯生料带包紧以防漏气。在80℃水浴上加热，每隔15min振摇1次，2h后，抽取反应瓶顶空中的气体测定。

3．1．2 乙撑硫脲(ETU)

3．1．2．1 土壤

称取50g土壤置于250mL三角瓶中，加入100mL甲醇浸泡过夜，振荡提取40min后，加2g助滤剂545，抽滤。滤渣再用60mL甲醇振荡提取20min，抽滤，再用30mL甲醇清洗滤渣。合并滤液于250mL圆底烧瓶中，用旋转蒸发器浓缩至1mL，待柱层析净化。

3．1．2．2 烟叶

称取20g鲜烟叶(干烟叶5g)置于250mL三角瓶中，加入100mL甲醇，振荡提取40min后，过滤。滤渣再用60mL甲醇振荡提取20min后，过滤，用30mL甲醇清洗滤渣。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

合并烟叶滤液于500mL分液漏斗中，加5mL去离子水，用80mL、80mL、60mL石油醚萃取，合并下层甲醇水相。将上层石油醚相合并于另一分液漏斗中，用50mL甲醇／水(9∶1，V／V)反萃取1次。弃去石油醚相，合并甲醇水相于圆底烧瓶中，用旋转蒸发器浓缩至近干，用1mL甲醇溶解，待柱层析净化。

3．2．2 柱层析净化

3．2．2．1 烟叶

在层析柱中依次加入3cm无水硫酸钠、4g弗罗里硅土、1g中性氧化铝、0．5g硅胶和3cm无水硫酸钠。用20mL石油醚预淋。小心加入样本溶液，用25mL石油醚／丙酮(4∶1，V／V)多次洗涤烧瓶并淋洗柱子，弃去。用50mL二氯甲烷／乙醇(95∶5，V／V)洗脱并收集，用旋转蒸发器浓缩至2mL，用甲醇定容至10mL，待测。

3．2．2．2 土壤

将SPE-C₁₈柱依次用5mL甲醇、5mL去离子水和5mL甲醇预淋。小心加入样本溶液，用15mL甲醇多次洗涤烧瓶并淋洗柱子，收集全部洗脱液，定容至15mL，待测。

3．3 气相色谱法测定(CS₂)

检测器 FPD

色谱柱 3mmi．d．×2m不锈钢柱，5%SE-30／ChromosorobW80～100目

检测温度 柱温60℃；进样口120℃；检测器120℃

载气 高纯氮，30mL／min

燃烧气 氢气0．9kg／cm²，空气1．2kg／cm²

进样量 10～100μL

保留时间 1．1min

3．4 液相色谱法测定(ETU)

检测器 UV

波长 240nm

色谱柱 ODS，4．6mm×150mm

柱温 30℃

流动相 甲醇／水(3∶7，V／V)

流速 0．5mL／min

进样量 10μL

保留时间 8．02min

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

5．1 气相色谱法(代森锰锌)

最小检出量1×10^－10g。

最低检测浓度 干烟叶、鲜烟叶和土壤均为0．001mg／kg。

回收率 干烟叶、鲜烟叶和土壤中添加代森锰锌0．1～1．0mg／kg时，平均回收率分别为85．8%～89．7%、83．0%～98．0%和87．6%～97．0%，见表2-20-12。

相对标准偏差 1．3%～7．0%，见表2-20-12。

表2-20-12 干烟叶、鲜烟叶和土壤中代森锰锌添加回收率及相对标准偏差实验结果