黄瓜、豇豆和土壤中残留量检测方法(方法一)

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河北省农林科学院遗传生理研究所 张少军 王莉 陈勇达 钱训 默涛

样本用丙酮水溶液提取，二氯甲烷萃取，衍生化后，液相色谱法(FD)测定。

1．主要仪器及设备

液相色谱仪 荧光检测器(FD)

组织捣碎机

超声波清洗器

旋转蒸发器

2．主要试剂

甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、1-甲基咪唑、三氟乙酸酐、二甲基二氯硅烷(用于试管硅烷化)、氯化钠、无水硫酸钠、28%氨水

阿维菌素标准品

3．检测步骤

3．1 提取

称取50g碎黄瓜(碎豇豆)样本，加100mL丙酮浸泡过夜，超声波振荡提取10min，静止沉降后将上清液过滤。用50mL丙酮洗滤渣，抽滤，合并滤液。用旋转蒸发器除去丙酮。

土壤样本取50g，提取液和洗涤液用1∶1丙酮水溶液，其他操作同黄瓜。

3．2 净化

将残余的水溶液转移至分液漏斗中，加入50mL10%氯化钠溶液，用50mL、30mL、30mL二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠柱脱水后，用旋转蒸发器浓缩至干。用6mL丙酮分3次将残余物溶解并转移入经硅烷化处理的具塞刻度试管中，用氮气流吹干。

3．3 衍生化

3．3．1 衍生化试剂的配制

衍生化试剂A：在一具塞刻度试管中加入3．6mLN，N-二甲基甲酰胺和0．4mLl甲基咪唑，混匀后立即置于冰浴中冷却1min，缓缓加入0．6mL三氟乙酸酐，摇匀。本试剂在每次衍生化时皆需新鲜配制。

衍生化试剂B：在一具塞刻度试管中加入3．0mL甲醇和0．2mL28%氨水，摇匀备用。

3．3．2 衍生化反应

向3．2的试管中加入0．2mL衍生化试剂A，超声波振荡1min后置于30℃水浴上反应1h，并不时摇动。取出后再加入0．1mL衍生化试剂B，摇匀。重新置于30℃水浴上反应30min，冷却至室温。加1．0mL甲醇、2．0mL蒸馏水和2．0mL乙酸乙酯，充分振荡，静置分层后用液相色谱法测定。阿维菌素标样系列需与每批样品同时进行衍生化测定。

3．4 液相色谱法测定

检测器 FD

波长 激发波长390nm，荧光波长475nm

色谱柱 ZORBAX ODS，150mm×4．6mm

柱温 40℃

流动相 甲醇／水(95∶5，V／V)

流速 1．0mL／min

进样量 10μL

保留时间 4．4min

4．结果计算

外标-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 2．5×10^－10g。

最低检测浓度 0．001mg／kg。

回收率 黄瓜、豇豆和土壤中添加阿维菌素0．005～0．10mg／kg时，平均回收率为90．4%～98．9%。见表1-1-1。

相对标准偏差 2．4%～8．1%，见表1-1-1。

表1-1-1 黄瓜、豇豆和土壤中阿维菌素添加回收率及相对标准偏差实验结果