(2)苹果和土壤中残留量检测方法(方法一)

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江苏省农药研究所 方慧珍 于传宗 杨建

样本用丙酮提取，弗罗里硅土柱层析净化，气相色谱法(NPD)测定。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪 氮磷检测器(NPD)

旋转蒸发器

超声波发生器

K-D浓缩器

层析柱 Φ18mm×370mm

2．主要试剂

丙酮(重蒸)、石油醚(60～90℃，重蒸)、二氯甲烷、无水硫酸钠、弗罗里硅土(180～250目)、硝酸银

缓冲溶液(pH8)0．827g磷酸氢二钠+33．916g磷酸二氢钠溶解并定容至1000mL

丙硫克百威标准品、克百威标准品、3-羟基克百威标准品。

3．检测步骤

3．1 丙硫克百威、克百威

3．1．1 提取

3．1．1．1 苹果

称取40g样本，加40mL缓冲溶液匀浆，加2mL0．1mol／L硝酸银和100mL丙酮，搅拌浸泡1h，过滤，滤渣用70%丙酮水洗涤。合并滤液在K-D浓缩器内除去丙酮。

3．1．1．2 土壤

称取50g样本，加30mL缓冲溶液和70mL丙酮，浸泡过夜。离心，取出上清液，残渣用丙酮50mL浸泡洗涤两次。合并上清液，浓缩去除丙酮。

3．1．2 液-液分配

将残余提取液移至分液漏斗中，加50mL饱和氯化钠溶液，用50mL、25mL、25mL二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，用无水硫酸钠脱水后，浓缩至近干。

3．1．3 柱层析净化

在层析柱中依次装入1cm无水硫酸钠、5g弗罗里硅土和2cm无水硫酸钠，用石油醚预淋。将浓缩后的样本用石油醚转移至柱顶。用石油醚／乙酸乙酯／异丙醇(70∶30∶1，V／V／V)洗脱，收集70mL洗脱液，浓缩，用丙酮定容至相应体积，待测。

3．2 3-羟基克百威

3．2．1 提取

称取50g苹果匀浆样本(土壤50g)，加100mL0．37mol／L盐酸，于95℃水浴中回流1h，用30mL0．25mol／L盐酸冲洗冷凝管。冷却后过滤，滤渣用50mL0．25mol／L盐酸抽洗。

3．2．2 液-液分配

合并滤液于分液漏斗中，加30g氯化钠，用100mL、50mL、50mL二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，用无水硫酸钠脱水，浓缩至近干。

3．2．3 柱层析净化

用石油醚将残余物转移至弗罗里硅土柱内。用110mL石油醚／乙酸乙酯(70∶30，V／V)淋洗，弃去。再用石油醚／乙酸乙酯／异丙醇(60∶40∶1，V／V／V)洗脱，收集洗脱液浓缩至近干。

3．2．4 水解

在浓缩液中加入10mL无水乙醇，2滴浓盐酸，于95℃水浴中回流40min。冷却后，加40mL水和10mL饱和氯化钠溶液，用30mL、15mL、15mL石油醚萃取。合并石油醚相，用无水硫酸钠脱水后，浓缩至相应体积，待测。

3．3 气相色谱法测定

检测器 NPD

色谱柱 0．8m×3mm玻璃柱，2%OV-17／ChromosorbW60～80目

检测温度 柱温240℃，进样口、检测器260℃(丙硫克百威)

柱温170℃，进样口、检测器240℃(克百威)

柱温170℃，进样口、检测器240℃(3-羟基克百威)

载气 高纯氮，50mL／min

燃烧气 氢气3．6mL／min，空气150mL／min

进样量 1μL

保留时间 丙硫克百威5．0min，克百威4．5min，3-羟基克百威6．0min

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 丙硫克百威3×10^－11g，克百威3×10^－11g，3-羟基克百威6×10^－10g。

最低检测浓度 丙硫克百威0．005mg／kg，克百威0．005mg／kg，3-羟基克百威0．01mg／kg。

回收率 苹果和土壤中添加丙硫克百威、克百威、3-羟基克百威0．05～1．0mg／kg时，平均回收率分别为79．8%～92．9%、81．5%～89．9%、73．5%～85．6%。见表1-5-2。

相对标准偏差 1．0%～8．9%，见表1-5-2。

表1-5-2 苹果和土壤中丙硫克百威、克百威、3-羟基克百威添加回收率及相对标准偏差实验结果