番茄和土壤中残留量检测方法

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国家环境保护总局南京环境科学研究所 单正军 石利利 朱忠林 金怡 蔡道基

样本用甲醇／水和丙酮／水提取，离子交换树脂净化，钢圈抑菌圈法测定。

1．主要仪器及设备

培养箱

K-D浓缩器

高压灭菌锅

层析柱 Φ10mm×20cm

2．主要试剂

交换树脂 Amberlife CG-120和CG-50型，Dowex 50W

甲醇、丙酮、柠檬酸、盐酸、硫酸、氨水、葡萄糖、琼脂、四环素、碳酸钙、磷酸氢二钠

春雷霉素标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 植株、番茄

称取50g切碎的样本，放入250mL磨口三角瓶中，加70mL甲醇和30mL蒸馏水，用稀盐酸调节pH至2．0，置于恒温振荡器中振荡提取1h。将提取液转入500mL的离心管中，离心，倾出上清液。残渣用60mL丙酮再提取一次，离心分离。合并提取液，用KD浓缩器(＜45℃)浓缩。浓缩液在冰箱中放置过夜。过滤去除沉淀物并用少量蒸馏水洗涤残渣。合并滤液，待净化。

3．1．2 土壤

称取50g风干土壤置于250mL磨口三角瓶中，加100mL30%丙酮／水溶液，用6mol／L盐酸调节pH至2．1，置于恒温振荡器中振荡提取1h。将提取液转入500mL的离心管中，离心，倾出上清液。残渣用60mL丙酮再提取一次，离心分离，合并提取液，用KD浓缩器(＜45℃)浓缩。浓缩液在冰箱中放置过夜，过滤去除沉淀并用少量蒸馏水洗涤残渣。合并滤液，待净化。

3．2 净化

3．2．1 植株、番茄

滤液通过填有2g AmberlifeCG-120的层析柱，用150mL蒸馏水淋洗，再用50mL1%氨水洗脱，收集pH8．0以上的洗脱液。将洗脱液调至pH4．2，减压浓缩(＜45℃)至近干，定容至一定体积，进行生物测定。

3．2．2 土壤

滤液通过填有2g Amberlife CG-50的层析柱，用150mL蒸馏水淋洗，再用50mL1%氨水洗脱，收集pH8．0以上的洗脱液。将洗脱液调至pH4．2，减压浓缩(＜45℃)至近干，定容至一定体积，进行生物测定。

3．3 生物测定

测定用菌株 稻瘟菌株P-2

繁菌培养基 稻秆50g(剪碎榨汁)，番茄汁300mL，碳酸钙3g，琼脂20g，加水至1000mL，调至pH6．0，分装于小试管中使其成斜面，灭菌后作繁菌用。

测定培养基 鲜稻叶100g(剪碎榨汁)，葡萄糖10g，琼脂30g，加水至1000mL，灭菌，使用时用1／20mol／L柠檬酸缓冲液等量稀释。

孢子悬浮液的制备 将稻瘟菌株P-2在繁菌培养基上于25～27℃下培养7～10天，用无菌水洗下孢子，用灭菌纱布过滤制成孢子悬浮液。

平板制作 将测定用培养基冷却至45℃左右时，加入适量孢子悬浮液，充分混合。取5mL迅速注入灭菌的培养皿(9cm)，轻轻摇动培养皿，使其成平面。

样本测定 平面凝固后，在培养皿表面作十字形放置钢环4个，间距约2．5cm。每个样本用5个培养皿，培养皿内的4个钢环分别添加1．6mg／L、0．8mg／L、待测液和稀释1倍的待测液，各0．5mL，置于27℃恒温培养箱内培养48h，测量抑制圈的直径。

4．结果计算

将抑菌直径与浓度的对数进行拟合得标准曲线，然后用标准曲线法定量。

5．方法灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 抑菌法0．5mg／L。

最低检测浓度 番茄、植株和土壤均为0．05mg／kg。

回收率 番茄、植株和土壤中添加春雷霉素1．0mg／kg时，平均回收率分别为80．4%、77．8%和74．3%。见表2-19-1。

表2-19-1 番茄、植株和土壤中春雷霉素添加回收率实验结果

其中，SH是高浓度标准溶液的抑菌直径，SL是低浓度标准溶液的抑菌直径，UH是添加样本提取液的抑菌直径，UL是UH稀释1倍后的抑菌直径。

回收率R的计算公式为：

logR=log2×［(ΣUH+ΣUL)－(ΣSH－ΣSL)］／［(ΣUH+ΣSH)－(ΣUL+ΣSL)］