小麦籽粒和土壤中残留量检测方法

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中国农业大学理学院 范志金 钱传范

土壤样本用甲醇／氨水提取；小麦籽粒、土壤样本用丙酮／水提取。二氯甲烷液-液分配，SPE-C₁₈柱净化，液相色谱法(UV)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 紫外检测器(UV)

振荡器

旋转蒸发器

高速组织捣碎机

pH计

2．主要试剂

甲醇(重蒸)、水(重蒸)、二氯甲烷、石油醚、丙酮、磷酸、氨水(NH₃·H₂O)、无水硫酸钠、氯化钠

单嘧磺隆标准品

SPE－C18

3．检测步骤

3．1 土壤

3．1．1 提取

称取20．0g风干后过40目筛的土壤样本于250mL具塞三角瓶中，用60mL甲醇／0．2mol／L氨水(1∶1，V／V)溶液浸泡2h，振荡提取0．5h，抽滤。用40mL提取液洗涤滤渣，合并滤液。

3．1．2 液-液分配

将滤液转移到500mL分液漏斗中，加100mL2%硫酸钠溶液和1．5mL0．2mol／L氨水，使pH10。用30mL×2二氯甲烷洗涤水相，弃去二氯甲烷相。再用30mL×2石油醚洗涤水相，弃去石油醚相。用磷酸调节水相pH3，用40mL×3二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠脱水后用旋转蒸发器(＜40℃)浓缩至近干。吹干后，用3mL重蒸甲醇溶解。

3．1．3 柱净化

SPE-C₁₈柱分别用乙醚、重蒸水、甲醇预淋。将上述样本溶液转入柱中，用5mL甲醇淋洗，收集全部8mL洗脱液，用旋转蒸发器(＜40℃)浓缩至近干，吹干后用甲醇／0．2mol／L氨水(1∶1，V／V)溶液定容至2mL，待测。

3．2 籽粒

3．2．1 提取

称取20．0g粉碎的小麦籽粒样本于250mL具塞三角瓶中，以100mL丙酮／水(3∶2，V／V)溶液浸泡2h，振荡提取0．5h，抽滤。用50mL提取液洗涤残渣。合并滤液，将滤液减压浓缩，蒸去丙酮。

3．2．2 液-液分配

在残余水提取液中加入100mL饱和氯化钠溶液，用磷酸调pH3，然后用30mL×3二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠干燥，减压浓缩近干，冷风吹干。加入100mL2%硫酸钠溶液，用0．2mol／L氨水调节pH10，用30mL×2石油醚和30mL×2二氯甲烷洗涤水相，去掉有机相。用磷酸调水相pH3，用30mL×3二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，经无水硫酸钠干燥，减压浓缩(40℃)至近干，冷风吹干，用3mL甲醇／水(1∶1，V／V)溶解。

3．2．3 柱层析净化

SPE-C₁₈柱用乙醚、重蒸水、甲醇预淋。将上述样品溶液转入柱中，用5mL甲醇／水(1∶1，V／V)溶液淋洗，收集全部8mL洗脱液，减压浓缩至干。用甲醇／0．2mol／L氨水(1∶1，V／V)溶解并定容，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 UV

波长 254nm

色谱柱 不锈钢柱ODS，250mm×4．6mm，5m，配备C₁₈预柱

流动相❶ (土壤测定) 甲醇／水(53∶47，V／V。其中水用磷酸调pH3)

流速 0．8mL／min

流动相❷ (籽粒测定) 甲醇／水(48∶52，V／V。其中水用磷酸调pH3)

流速 0．5mL／min

柱温 40℃

纸速 2．5mm／min

灵敏度 0．02Au／mV

衰减 0

进样体积 20μL

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 4×10^－9g。

最低检测浓度 0．02mg／kg。

回收率 小麦籽粒和土壤中添加单嘧磺隆0．05～1．00mg／kg，平均回收率分别为93．2%～97．1%和95．1%～103．8%。见表3-39-1。

相对标准偏差 1．5%～11．8%，见表3-39-1。

表3-39-1 小麦籽粒和土壤中单嘧磺隆添加回收率及相对标准偏差实验结果