血清蛋白电泳

人体血清蛋白电泳中的白蛋白为60%～70%,α₁球蛋白为3%～4%,α₂球蛋白为6%～10%,β球蛋白为7%～11%,γ球蛋白为9%～18%。

血清蛋白电泳

电泳是在电场作用下，使蛋白质分子在电解质溶液中浮游，蛋白质分子正负电荷朝着逆电场方向泳动，这种现象称为电泳。在蛋白质分子表面有很多COO^-基和NH⁺₃基。在酸性溶液里COO^-与H⁺结合，生成不离解的COOH基，蛋白质分子因表面的NH⁺₃基过剩而带正电；在碱性溶液里，NH⁺₃基与OH^-作用生成H₂O和不带电荷的NH₂基，蛋白质分子因COO^-基过剩而带负电荷。使某一蛋白质带有同样数量正负电荷溶液的pH值称为等电点，在等电点pH的溶液中，蛋白质分子在电场中不向任何一极移动。在较等电点pH高的溶液中，蛋白质带负电荷，在电场中向阳极移动；在较等电点pH低的溶液中，蛋白质带正电荷，在电场中向阴极移动。不同结构的蛋白质，在分子表面有着数量不等的COO^-基和NH⁺₃基，因此等电点有明显差别，在电场中会朝不同方向移动。
(1) 电泳速度： 溶液中电解质分子在电场中单位时间内移动的距离，称为电泳速度。电泳速度(v)与蛋白质分子表面的荷电量(Q)和电场强度(E)成正比，即v=Q/f·E。电场强度对电泳移动速度起着决定性作用，它以每厘米的电位降表示。式中f为摩擦系数，f=6πηγ,η为溶剂的粘度，γ为分子半径，因此，质点的形状和介质的粘度对电泳速度也有影响。
(2) 电泳迁移率： 在单位电场强度下物质的电泳速度称为电泳迁移率。迁移率,d为移动距离(cm),t为泳动时间(s),E为电场强度(V/cm)。蛋白分子的迁移率决定于表面电荷、缓冲液的pH、电解液的离子强度、支持体特性、蛋白分子大小和形状等因素，并受电渗现象影响。
❶缓冲液的值取为pH8.6，在此pH值下所有蛋白阴离子向阳极移动。pH值在8.6以上时，蛋白质容易引起变性； pH值在8.6以下时，白蛋白和a₁的区带分离将变差；
❷缓冲液离子强度越大，蛋白质移动速度越慢，反之越快；
❸区带电泳的各种支持物在缓冲液中都多少带有电荷，在纸电泳的情况下，滤纸带有负电荷，而与滤纸相接触的水溶液则带有正电荷，由于滤纸是固定不动的，滤纸上的液体便向阴极移动，因而影响了液体中蛋白质分子的迁移率。这种电场中液体对于一个固定的固体相对移动的现象称为电渗。
(3) 电泳分类： 电泳可分为三大类。
❶显微电泳： 即在显微镜下观察胶粒的电泳现象。此法的应用限于不溶的胶粒或包在固体上的薄膜，在生化领域中应用不甚广泛；
❷自由界面电泳：即胶体溶液与溶剂形成界面后的电泳现象。它不受支持体的影响，分离效果较好，适用于胶体纯度的鉴定及电泳速度的测定；
❸区带电泳（也称区域电泳）:即在各种不同惰性支持体中进行电泳，蛋白中不同成分电泳后形成带状区间。区带电泳样品可多可少，操作简便，设备简单，经济，在临床生化中被广泛应用。区带电泳按支持体物理性状的不同可分四类。滤纸及其他纤维（如醋酸纤维）电泳；粉末电泳(如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电泳)；凝胶电泳(如琼脂、硅胶、淀粉凝胶电泳)；线丝电泳(如尼龙丝，人造丝电泳)。
电泳设备 由电泳仪、电泳槽、点样器、脱色机等组成。
(1) 电泳仪： 它是一直流稳压设备，其作用是将交流市电压变换整流、稳压而输出不受负载变化或电网电压波动影响的直流电。一般电泳仪由变压器、整流器、稳压电路、指示器等组成。其电压和电流可调，以按实验或临床需要选择。
电泳仪分常压电泳仪和高压电泳仪两种。
❶常压电泳仪：输出电压0～500V，输出电流0～50mA。用旋钮调节所需输出电压、电流；
❷高压电泳仪： 一般用倍压整流方式或用高压变压器使市电变成高压，经整流后输出。其最高电压可达2000～6000V，电流可达50～400mA，使用时，一般电位梯度取70～200V/cm或更高。由于高压电泳时，纸上发热量与电位梯度的平方成正比，因此必须有冷却装置，一般用循环水冷却，以避免扩散，防止蛋白质多肽链变性，肽链断裂和干坏。
(2) 电泳槽： 它是盛放缓冲液、电极、和不同支持体的容器。电泳槽一般有水平型和垂直型二大类。电泳槽底部装有白金丝电极，其热效应小，不污染缓冲液，可长期使用。电泳槽应有良好的热平衡。
(3) 点样器： 亦称加样器。玻璃吸管加样器的加样量不一，而且加样不整齐。平行金属丝加样器定量精确，电泳后区带整齐。
(4)脱色机： 它主要用于电泳膜片染色后的脱色，以代替手工摇动脱色。常用脱色机有两种，一种模拟手工动作，依靠电机带动凸轮，使脱色盘作左右摇摆，进行自动脱色；另一种在脱色盘内装有水循环泵，循环水使脱色加快。脱色后，电泳膜片经烘干就显示出明显的区带。早期区带的定量是用洗脱法，即将每条区带分别剪下，浸入一定量的脱色液中脱色，脱色液的深浅与各蛋白质区带的浓度成正比，再将脱色液分别进行比色，求得各蛋白质区带在血清蛋白中所占的百分比。洗脱法既不准确，又不方便，实际已被光密度计法代替。
光密度计能对各种不同支持体区带电泳进行迅速的定量测定，并能自动显出各区带百分比，画出蛋白电泳后的图谱，如图1所示。当

区带电泳图谱

输入总蛋白值后，可以打印各峰绝对含量及血球蛋白比值。光密度计的扫描方式可分为光扫描和机械扫描两种，信号接收方式可分为反射式和透射式两种。一般常用的光密度计大都是机械扫描和透射式(参见“光度法技术”条)。透过膜片的光信号经光电转换和对数放大后，可得到与光密度成线性关系的输出，进而可求出每区带百分比浓度。使用光密度计以前，首先必须用标准膜片进行标定。

血清蛋白电泳serum protein electrophoresis

是利用血清蛋白质分子量不同，在碱性溶液中所带电荷不同，在电场中移动速度不同的原理而设计的一种测定和区分蛋白质的方法。常用方法主要是醋酸纤维薄膜法和琼脂糖凝胶法。前者更为常用。正常值醋酸纤维素膜法：白蛋白(A)0.61～0.71，甲₁种球蛋白(α₁)0.03～0.04，甲₂种球蛋白(α₂)0.06～0.10，乙种球蛋白(β)0.07～0.11，丙种球蛋白(γ)0.09～0.18。A增高临床上少见，减低多见于慢性肝病、慢性消耗性疾病等；α₁增高多见于肝硬化、肾病综合征、肝癌等。应当指出，肝病时α₁增高常表示病情较轻，减低常指示病情较重；α₂增高多见于淤胆性肝硬化、系统性红斑狼疮等。增高或减低亦反映肝病的轻重；β增高常见高脂血症、淤胆性肝硬化、多发性骨髓瘤等，减低主要见于肝病时，且对判定其预后有一定价值；γ增高几乎所有肝病均可出现，并与肝细胞损害程度、病情轻重紧密相关，此外，多发性骨髓瘤、结缔组织病、感染性疾病和寄生虫病均见增高。减低见于丙种球蛋白缺乏症、肾病综合征及淋巴组织受损的疾病等。