血清絮浊试验

在血清中加入某些试剂，如一定浓度的重金属离子、盐、麝香草酚和脑磷脂胆固醇等，能与蛋白质反应发生混浊，称浊度反应；放置12～48h，可呈现絮状，称絮状反应。这些试验分别被称为血清浊度试验和絮状试验，统称为血清絮浊试验。血清絮浊试验，都是着重检查血清蛋白质的胶体不安定性，故又称血清胶体（或蛋白质）不安定试验或胶体试验。
肝脏是参与蛋白质代谢的重要脏器，能合成全部血浆白蛋白和部分球蛋白。肝脏功能障碍可使血清的蛋白质成分发生相应的改变，影响血清蛋白质胶体安定性，出现絮浊试验阳性反应。
絮浊反应的机理还不太清楚，但已知其变化的基础与血清蛋白质的质和量以及理化性质有关。由于血清蛋白质改变不仅与肝脏有关，而且也受肝外许多因素影响，所以血清絮浊试验不是诊断肝病的特异性检查。一般认为血清中α₂、β和γ球蛋白分子量较大，带电荷较少，易与加入的试剂相结合，而发生絮浊反应，属于所谓血清蛋白质胶体不安定因子；白蛋白和α₁球蛋白，因分子量小，带电荷较多，属胶体安定因子。在正常血清中，两者保持一定比例，维持血清蛋白质胶体安定性，加入试剂后，仅产生轻微的或不发生絮浊反应。凡能使不安定因子增加，或安定因子减少的情况和疾病，都可使血清絮浊反应增强。反应的强弱，主要取决于各种蛋白质的平衡状态，并非完全决定于任何一种蛋白质的变化。它对肝病的诊断意义，主要是反映肝脏炎症，并不完全直接代表肝细胞损伤的轻重程度，也不能作为判定肝病预后的根据。自Brahmachari在1917年用蒸馏水稀释高球蛋白血清，出现絮浊现象，即水稀释试验，用于临床以来，到目前为止，絮浊试验已有几百种。虽然其试剂、方法、絮浊物和影响因素不尽相同，但多数试验的原理大致相似。其中多数试验已被淘汰，现使用的仅有十几种，最常用的是硫酸锌浊度试验、麝香草酚浊度试验、碘液试验和脑磷脂胆固醇絮状试验等。
硫酸锌浊度试验 硫酸锌浊度试验最初是用于测定血清丙种球蛋白，后用于检查肝功能。在低离子强度，pH为7.5的巴比妥缓冲液中的低浓度硫酸锌，能使血清γ球蛋白与锌离子结合，改变血清蛋白质胶体平衡，使浊度增加。其浊度与γ球蛋白量成正比，关系为： 硫酸锌浊度(Kunkel单位)×0.053+0.5=γ球蛋白g/dl血清。正常值为4～12Kunkel单位。影响测定的因素较多，如室温、试剂的pH、比浊标准物和配制方法及判定结果的间等， 因而易发生较大的误差。 在进行性肝硬变和慢活动性肝炎，阳性率最高，有的可达20u以上。急性肝浊度上升程度，不如慢性活动性肝炎明显，且反应较转氨酶为慢。大多数肝外阻塞性黄疸，硫酸锌浊度试验正常，故可用以鉴别阻塞性和肝细胞性黄疸，若阻塞性黄疸伴有肝细胞损害，浊度也可增加。凡使球蛋白增加的肝外性疾病，也可使硫酸锌浊度增加，如急性传染病急性期后或恢复期、抗链菌溶血素“O”效价高的风湿病、慢性结核病、黑热病、疟疾、类风湿病、系统性红斑狼疮、感染性心内膜炎、多发性骨髓瘤和淋巴瘤等。硫酸锌浊度过低也属不正常，见于先天性和获得性低或无γ球蛋白血症。
麝香草酚浊度试验和麝香草酚絮状试验 将用低离子强度pH7.55或7.8巴比妥缓冲液溶解的麝香草酚，加入血清中，能使血清球蛋白溶解度和脂质分散力降低，形成γ、β球蛋白、脂质和麝香草酚复合物，产生混浊，强度以单位表示，称为麝香草酚浊度试验；放置18～24小时，观察出现絮状，其结果用“-”～“++++”表示，称为麝香草酚絮状试验。除γ球蛋白能促进絮浊反应外，由于麝香草酚的酚基与β球蛋白、β脂蛋白和脂质有亲和力，也能增加浊度。麝香草酚浊度试验正常值为6Shank-Hoa-gland u以下(0.0962N氯化钡3ml，用0.2N硫酸加至100ml，产生的浊度相当20Kunkel或Shank-Hoagl-and单位)。麝香草酚絮状试验正常值-～±。食入大量脂肪，麝香草酚浊度可比空腹时增加1～4u而出现假阳性，故应在空腹状态抽血检查。麝香草酚絮状试验受食后血脂上升的影响较小。麝香草酚浊度明显增加，见于肝硬变、病毒性肝炎、中毒性肝损伤和慢性活动性肝炎等。肝外阻塞性黄疸阳性率较低。限局性肝病为轻或中度升高。急性病毒性肝炎时，麝香草酚絮浊试验阳性反应的出现较脑磷脂胆固醇絮状试验为迟，多在患病一周后逐渐上升，但持续时间却较长，在症状缓解后，其阳性结果仍可保持一定时间，甚至转氨酶已缓缓下降，还可短期继续上升。若麝香草酚絮浊反应持续不降者，也可能是肝细胞功能虽已恢复，而肝脏间质尤其是肝门，仍有炎症活动，或已转为慢性肝炎。麝香草酚絮浊试验可出现阳性反应的肝外疾病有系统性红斑狼疮、疟疾、黑热病、感染性心内膜炎、类风湿病、多发性骨髓瘤和原发或继发性高脂血症等。此试验假阳性较多，且与转氨酶的结果常不一致，故应注意。
脑磷脂胆固醇絮状试验 将肝实质有损伤者的血清与羊脑磷脂胆固醇混悬液相混合，放置24～4Sh，则发生絮状现象，称为脑磷脂胆固醇絮状试验。产生的机理是血清中γ球蛋白能与脑磷脂胆固醇微粒形成为复合体，使表面张力降低，增加相互间的附着性，而发生絮浊反应，其结果以“-”～“++++”表示。正常为“-”。肝实质病变多为阳性，如病毒性肝炎、肝硬变、中毒性肝损伤和肝坏死等。急性病毒性肝炎时，其阳性反应较其它絮浊试验为早，阳性率可达80%以上，且能在黄疸前期出现，病情好转时它也先于其他絮浊试验而下降； 若持续强阳性，常提示肝实质病变有进展。肝内胆道感染时，阳性率也较高。胆石症所致的阻塞性黄疸出现阳性者一般反应较弱。肝外疾病所造成的肝损伤或血浆蛋白质的变化，也可发生阳性反应，如感染性心内膜炎、疟疾、黑热病和系统性红斑狼疮等。脑磷脂胆固醇絮状试验与麝香草酚浊度和硫酸锌浊度相比较，对肝病的诊断价值虽较敏感，但所用试剂为生物制品，不够稳定，保存和制备都较其他絮浊试验试剂的条件要求较高。
碘液试验 根据Lugol碘液与血清各一滴相混合后是否出现沉淀，判断阳性或阴性。产生混浊沉淀者为阳性，其结果以“-”～“++++”表示。正常值为“-”。此试验于1950年由Mallen报告，目的是沉淀血清中异常蛋白，主要是指增加的γ球蛋白。临床应用价值与硫酸锌浊度和麝香草酚浊度试验相类似。肝实质弥漫性疾病，如肝炎、肝硬变等多为阳性。本试验优点是操作简便、快速、成本低。但特异性较差，假阳性较多。
酚试剂絮状试验 也称Jirgl试验，Jirgl于1957年在测定各种黄疸病人的粘蛋白时，将Folin-Ciocalteu试剂加于阻塞性黄疸血清中， 发生絮状反应， 而加到其他黄疸血清时，则无此现象。絮状强度用“-”～“++++”表示。正常为“-”。目前对其机理，还不太清楚，它与血清中粘蛋白含量并无关系，可能与阻塞性黄疸时，血中出现的异常脂蛋白X有关。
不要将酚试剂絮状试验与酚浊度试验相混淆。酚浊度试验的原理和意义与麝香草酚浊度相似。血清中加入酚而生成浊度，强度用Kunkel单位表示。正常值为8～15u。其浊度强弱，除与γ、β球蛋白量有关外，也与血清中脂质含量成正比，13.1×酚浊度单位+388.1=总脂mg/dl。