血清总胆红素和直接胆红素-咖啡因测定法serum total bilirubin and direct bilirubin-caffeine examination method

本测定法的基本原理是利用血清中直接胆红素易溶于水，能与重氮试剂直接反应生成偶氮胆红素 ；而游离胆红素必须经加速剂破坏其氢键，才能与重氮试剂起反应。本法是以 醋酸钠-咖啡因-苯甲酸钠试剂作加速剂，使胆红素与重氮试剂中的偶氮苯磺酸生成紫色的偶氮胆红素。醋酸钠缓冲液保持偶氮反应的适宜pH；咖啡因甲酸钠促进胆红素与偶氮苯磺酸的耦联反应。抗坏血酸（或叠氮钠）破坏剩余偶氮试剂，终止偶氮反应。最后加入强碱性酒石酸溶液使紫色偶氮胆红素转变成蓝色偶氮胆红素。其大体操作步骤为取小试管3支，按下表加入各液。

咖啡因法胆红素测定操作加样步骤

在结合胆红素管，当加入重氮试剂混匀后1min，加入5g/L叠氮钠0.05ml和咖啡因试剂1.6ml；总胆红素管室温放置10min。然后向各管加入酒石酸钾钠1.2ml，混匀后，用分光光度计600nm波长，以空白调零，读取各管吸光度，可从预制的标准曲线查得总胆红素和结合胆红素浓度。正常参考值血清总胆红素5.1～17.1μmol/L，结合胆红素0～6μmol/L。其血清总胆红素和结合胆红素增多与减少的临床意义同范登白试验。