茎尖嫁接shoot-tip grafting

用幼小的茎尖作接穗培育无病毒繁殖材料或苗木的一种嫁接方法。因为它是将植株的嫩尖嫁接在试管内培养的幼小砧木上， 又称微型嫁接。藉以获得无病毒植株， 通过商业苗圃扩大繁殖，实现改良品种或工厂化育苗。茎尖嫁接技术已在柑橘上应用， 其他果树如桃、杏、梅、苹果、葡萄和油梨等也有应用， 并得到了桃和苹果的脱毒植株。
果树在长期的无性繁殖过程中常感染一种或多种病毒、类病毒和类菌原体等病源微生物， 对果树的生长、结果造成极大危害（见无病毒苗）。为防止这些病害的蔓延危害， 需要使用无病毒繁殖材料。柑橘类果树虽曾用多胚性品种种子播种得到无病的珠心系植株。但它们进入结果期迟， 枝条多刺， 果品的品质不够一致。用温热疗法则不能消除耐高温的类病毒病害， 因此， 根据一般植物生长点不带病原和通过茎尖培养可以获得无病毒植株的研究， 苹果、柑橘果树曾用茎尖培养脱毒， 但柑橘成龄植株的茎尖培养后难以分化成完整植株。美国默拉什奇(T. Murashige) 等对柑橘改用茎尖嫁接的方法得到少数植株， 经鉴定证明其中部分植株的裂皮病毒已经脱除。如果结合母株热处理采取茎尖嫁接， 还可消除更多的病毒病害， 如木质陷孔病、顽固病、衰退病、苗黄型衰退病、传染性杂色花叶病、脉突病及黄脉病。纳瓦罗(Navarro)等详细研究了许多因子对茎尖嫁接成活率及脱毒率的影响，建立了柑橘的常规的操作方法。
砧木准备 先剥去种子的外种皮和内种皮， 用加0.1%吐温20湿润剂的0.5%次氯酸钠溶液(商品漂白粉1:9水溶液)消毒10分钟， 再用灭菌水洗3次。在加有1%琼脂的MS培养基上发芽。培养基用25×150毫米试管分装， 每管25毫升， 高压灭菌。播后在27℃恒温下遮光2个星期。
接穗准备 采田间或温室生长植株1～3厘米长的嫩梢，去较大叶， 用解剖刀切下尖端1厘米长的梢段，用加0.1%吐温20的0.25%次氯酸钠(商品漂白粉稀释20倍)溶液消毒5分钟，再用灭菌水洗3次。在无菌环境中， 解剖镜下剥去叶片， 切下带2～3个叶原基的茎尖。嫁接时在无菌条件下从试管中取出2个星期苗龄的砧木， 截顶留1.5厘米茎， 切根尖留4～6厘米，去子叶和腋芽。在砧木顶侧开倒“T”形切口， 横切一刀，竖切平行两刀， 深达形成层， 挑去三刀间的皮层， 将切下的茎尖放入切口， 切面朝下与砧木的横切面相贴。
嫁接苗管理 将嫁接苗放入试管内培养。以MS为培养基，并每升加盐酸硫胺素0.2毫克， 盐酸比多醇1.0毫克，烟酸1.0毫克，肌醇100毫克，和蔗糖75克。用25毫米×150毫米试管分装，每管25毫升，高压灭菌。管内事先放入支撑苗的滤纸， 中央打孔，以便插入苗根。在27℃恒温下培养，每天1 000勒克斯(1x)光照16小时。茎尖苗培养3～6个星期， 至少长出两片叶后移栽。移前在1万勒克斯(1x)的强光下继续照2个星期， 使植株强健。移栽用的土壤要适于柑橘生长并经高温灭菌。移栽后用聚乙烯塑料袋套住花盆，捆住袋口。1个星期后打开袋口， 2个星期后去袋。为克服移栽小苗因污染死亡并加速其生长， 可直接把试管内的茎尖苗再嫁接在盆栽的粗壮砧木上，再经过利用血清或嫁接鉴定，确认已不带有需要脱除的病毒病源， 即作为无毒母株系保存， 供繁殖无毒苗木应用。