花环形成试验
花环形成试验，是基于细胞粘附的原理测定淋巴细胞表面受体的一种方法，用以检测T或B淋巴细胞的数目和功能。试验结果由于在淋巴细胞周围粘附有一圈红细胞，或淋巴细胞粘附于作为抗原的靶细胞周围，形成类似花环形状，故称花环形成试验。常用的试验方法有以下几种：
E(erythrocyte)花环形成试验 T淋巴细胞表面有由两个糖蛋白分子组成的受体，绵羊红细胞无需处理就能通过此受体粘附在T淋巴细胞的周围，形成花环状，故称E花环形成试验，又称自然花环形成试验。其方法是将被检者淋巴细胞分离，使之与绵羊红细胞作用，温育、离心后置4℃冰箱中4～18h，然后离心取沉淀物制片、染色镜检。染色可用吖啶橙或Giemsa染色液，前者用荧光，后者用自然光作光源，置显微镜下观察。凡淋巴细胞周围粘附有三个以上绵羊红细胞者为花环细胞，计数200个淋巴细胞中的花环细胞数，并算出百分数。 余、谢少文等用1974年WHO法正常值为51～72%。此法检出的是总E花环细胞(ET-RFC)，它代表T淋巴细胞的总数。
由于T淋巴细胞存在异质性亚群，对绵羊红细胞具有不同的亲和力，根据不同亲和力而有不同的E花环形成试验。除总E花环试验外，还有活性E花环形成试验，又称早期E花环形成试验，即加入绵羊红细胞后15min计数形成花环的淋巴细胞占总淋巴细胞数的百分率，正常值为28.4±6.5%(余、谢少文等：临床免疫技术，308页，上海科学技术出版社，1982)，约占ET-RFC的1/3～1/2，活性E花环形成细胞 (EA-RFC)可能是T细胞中对绵羊细胞有高度亲和力并具有免疫活性功能的一组亚群。稳定性E花环细胞(ES-RFC)在末梢血液中出现，原来为数甚少，但经神经氨酸酶或植物血凝素等有丝分裂素处理后或经同种白细胞致敏过的T淋巴细胞形成的ES-RFC数明显增高。ES-RFC较为稳定，在37℃不能解离，为T淋巴细胞的特殊亚群，可能是分化较差的未成熟细胞； 巨大E花环细胞(EG-RFC)是用植物血凝素刺激培养后，有36个以上绵羊红细胞吸附在淋巴细胞上的花环细胞，为T淋巴细胞亚群之一。
各种E花环形成试验，是体外测定T淋巴细胞及其亚群的一种简便方法，用以衡量机体细胞免疫水平，对了解某些与免疫功能有关疾病的病因和发病机理，以及指导治疗等都有一定价值。E-RFC值降低，常见于原发或继发性细胞免疫缺陷性疾病，如先天性胸腺发育不全综合征 (Nezelof Syndrome)、胸腺无能综合征 (DegeogeSyndrome)、大量应用免疫抑制剂等。一些恶性肿瘤，尤其是晚期患者，E-RFC值降低，手术切除或使用细胞免疫增强剂治疗有效者，E-RFC值特别是活性花环值可恢复。系统性红斑狼疮、皮肌炎、类风湿性关节炎、节段性回肠炎、乙型肝炎表面抗原阳性的慢性活动性肝炎的病人E-RFC值降低。经用细胞免疫增强剂治疗，临床症状有显著改善者，E-RFC可恢复到正常水平。某些病毒感染如麻疹、流感及带状疱疹等E-RFC下降。E-RFC值升高见于甲状腺功能亢进症和慢性甲状腺炎等。脏器移植发生排异反应时，E-RFT值可较前迅速上升。E花环形成试验也是纯化T淋巴细胞及其亚群的一种方法，因为T淋巴细胞与绵羊红细胞形成花环后，借密度梯度离心可获得较纯的T淋巴细胞。
EAC (erythyrocyte-antibody-complement)花环形成试验 B淋巴细胞上的补体受体可与活化的C3呈特异性结合。人们用红细胞(E)与抗红细胞的抗体(A)相结合而形成复合物 (EA)，此复合物通过传统途径激活补体而产生活化的C3，然后EA与活化C3结合形成EAC。凡带C3受体的淋巴细胞，可通过C3受体与EAC结合形成花环，据此可检测淋巴细胞中的B淋巴细胞。正常人血中EAC花环细胞形成率为20～30%。
EAC花环形成试验除测定外周血中有补体受体的B淋巴细胞数外，还可检测淋巴器官冰冻组织切片上补体受体淋巴细胞的分布，用以探讨免疫缺陷病和淋巴细胞增生性疾病的病因、诊断和治疗等。也可用于淋巴细胞性白血病的免疫学分型，此外还可用于B淋巴细胞的分离和提纯。
EA花环形成试验 是一种检测B淋巴细胞数量的试验，B淋巴细胞表面有Fc受体，以红细胞(E)与相应的抗红细胞抗体(A)相结合形成EA，此复合物中抗体的Fc段可与B细胞的Fc受体结合形成花环，计算花环形成率，正常值为23.1±7.7%(余、谢少文等：临床免疫技术，329页，上海科学技术出版社，1982)。
特异性花环形成试验 被抗原致敏的T淋巴细胞能特异地粘附在含有相应抗原的靶细胞周围，形成特异性花环。根据试验结果可大致估计肿瘤病人特异性细胞免疫功能和移植组织存活的可能性大小。将切除的肿瘤组织作组织培养，待细胞生长后加入病人或受体的淋巴细胞，培养2～3d后，进行固定、染色，镜检可见淋巴细胞粘附在肿瘤细胞周围形成花环。形成的花环愈多，说明针对肿瘤的细胞免疫功能愈好，预后较好。
如将移植器官的细胞作培养，待细胞生长后再与受者的淋巴细胞共同培育，然后染色、镜检。可见在移植组织的细胞周围粘附有淋巴细胞，形成花环。这种花环细胞形成愈多表明组织抗原相容性差别越大，移植器官受排异的可能性愈大。