脑脊液吖啶橙荧光染色法cerebrospinal fluid acridine orange fluorescence stain method

CSF细胞染色法之一。其方法是：
❶依次竖片于95%、80%、70%、60%、50%甲醇溶液内各3min;
❷置片于醋酸内1min;
❸蒸馏水轻洗；
❹置片于0.1%吖啶橙磷酸缓冲液中3～5min;
❺竖片于磷酸缓冲液中数小时，充分脱色；
❻氯化钙溶液中分化1～2min;
❼磷酸缓冲液中冲洗轻洗以终止分化；
❽放上盖玻片后镜检。吖啶橙磷酸缓冲液（不稳定）配制时，可用磷酸缓冲液(pH6.0)稀释0.1%的吖啶橙标准液（后者较稳定）。磷酸缓冲液的制备：1/15M Na₂HPO₄(蒸馏水1000ml中含9.465g)4份加1/15M KH₂PO₄(蒸馏水1000ml中含9.072g)23份。氯化钙溶液(pH6.0,0.1M)的制备：蒸馏水1000ml中溶解氯化钙11.099g。镜检光源要求紫外线丰富，最好用高压汞灯或Xenon管，光源与聚光镜间置增强性滤片，物镜与目镜间则置吸收性滤片，以保护眼睛，免遭紫外线损伤。吖啶橙荧光染色可用于观察胞浆活力，吖啶橙显示荧光异染性，低密度色素呈绿色，高密度色素呈红色。由于吖啶橙对胞浆RNA比核的DNA有较大的亲和力，故胞浆呈红色，核呈绿色或黄绿色。细胞的DNA含量是恒定的，RNA则随胞浆活力而改变，因此镜检下细胞核呈均一的绿色或黄绿色，胞浆则呈暗棕色或红色，借此可识别CSF内含RNA较高的恶性肿瘤细胞。