肠道病毒诊断血清

肠道病毒是脊髓灰质炎Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，柯萨奇A组1-24型、B组1-6型以及埃柯(ECHO) 1-34型病毒的总称。用各种型的病毒分别免疫动物，使动物产生相应抗体，以中和试验方法鉴别未知肠道病毒的抗血清，统称为肠道病毒诊断血清。
肠道病毒的血清型相当复杂，现已知：
❶柯萨奇A23型与埃柯9型属于同一型病毒，现统称埃柯9型。
❷柯萨奇A₃与A₈、A₁₁与A₁₅、A₁₃与A₁₈之间有交叉抗原。
❸埃柯1型与8型具有共同抗原，埃柯1型抗原谱较广。
❹埃柯10型现被划为呼吸道肠道(Reo)病毒第1型。
❺埃分中和柯萨奇A24型病毒，但柯萨奇A24型病毒抗血清不能中和埃柯3i A34病毒的原始株。
❼从第68型起，新发现的肠道病毒不再进一步命名为脊髓灰质炎、柯萨奇或埃柯病毒，而统一命名为肠道病毒第×型。
诊断血清的制备
(1) 用于组织培养中和试验定型的诊断血清： 制备抗原的毒种，经标准诊断血清标化，无交叉抗原，方可用以制备诊断血清。毒种接种细胞培养，制成病毒悬液，经物理及化学方法处理制成浓缩抗原。用浓缩抗原加福氏佐剂免疫动物。家兔、羊和马均可作为免疫用动物，动物经3～5次免疫后可取血测定血清效价，效价满意即可放血。每只动物的血分开放置。所得单型血清按需要量配制成组合血清，或按1～2毫升分装于安瓿中，放-20℃低温保存或冷冻干燥后放4℃保存。血清保存时间约2年左右，超过2年，如血清效价无明显降低，仍可继续使用。用前血清于56℃经30分钟灭活。

A-H组合血清的配制和定型结果判定表

组别 血清型	A	B	C	D	E	F	G	H	中和的组别
柯萨奇 A7 A9 A16 B1 B2 B3 B4 B5 B6	x	x							AB
		x					x		BG
								x	H
	x		x						AC
		x		x					BD
			x				x		CG
	x				x				AE
			x		x				CE
						x		x	FH
埃柯 1 2 3 4 5 6 7 9 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 29 30 31 32 33	x							x	AH
		x	x						BC
		x						x	BH
	x						x		AG
	x				x		x		AEG
			x	x					CD
	x					x			AF
		x				x		x	BFH
					x				E
			x					x	CH
				x	x				DE
				x		x			DF
	x								A
				x			x		DG
					x		x		EG
					x	x			EF
		x				x			BG
						x	x		FG
		x							B
					x			x	EH
							x	x	GH
			x						C
				x					D
		x		x		x			BDF
						x			F
	x		x			x			ACF
			x		x		x		CEG
							x		G
				x	x			x	DEH
	x			x					AD

注：
❶ 各组血清由纵行带×的单价血清混合配成。

❷ 埃柯8、10及28血清型未包括在内。

J-P组合血清的配制和定型结果判定表

组别 血清型	J	K	L	M	N	O	P	中和的组别
柯萨奇 A1 A2 A3 A4 A5 A6 A8 A10 A11 A12 A13 A14 A15 A17 A18 A19 A20 A21 A22	x							J
		x	x					KL
						x	x	OP
	x						x	JP
	x				x			JN
			x					L
							x	P
						x		O
		x			x			KN
	x			x	x			JMN
				x				M
	x					x		JO
		x						K
		x				0		KO
			x	x				LM
				x			x	MP
	x		x					JL
				x	x			MN
			x			x		LO

注：
❶ 各组血清由纵行带×的单价血清混合配成

❷ 柯萨奇A₂₃、A₂₄血清型未包括在内

血清的检定包括以下各项：
❶无菌试验。
❷物理检查。
❸效价测定： 将不同稀释度的血清 (从1∶320或以上开始)与100TCID₅₀/ml同型病毒等量混合，用组织培养中和试验方法，测定中和抗体的效价。血清效价一般不应低于1∶1280。
❹交叉中和试验：将血清稀释成1∶50，与100TCID50/ml的异型或异种病毒作交叉中和试验。一般1∶50的血清不应中和100TCID₅₀/ml的异型或异种病毒，如发生中和现象，应将该血清连续2倍稀释，分别加入等量的异型或异种病毒。如果对异型或异种病毒的交叉中和滴度未超过该血清效价的40个中和单位的稀释度时，仍认为合格，如超过40个中和单位的稀释度，则为不合格。
❺毒性试验： 每只动物的血清稀释成1∶10，各取0.2毫升接种2支，种于0.8毫升维持液的细胞管，置37℃培养7天，观察细胞有无脱落现象。
(2) 用于乳鼠中和试验定型的诊断血清： 用乳鼠制备的抗原包括柯萨奇A组病毒 (柯萨奇A_7、A₉、A₁₆型除外)，必要时还包括B组病毒。每型毒种以腹腔及皮下同时注射乳鼠一窝，A组病毒用2天龄的，B组病毒用1天龄的，每窝以7～8只为宜，注射量各为0.03ml。待出现典型症状后，立即将病鼠取出处死，经乙醚消毒后，剥去皮肤，将躯体及四肢的肌肉和骨胳用无菌生理盐水制成20%悬液，经1000转/分离心10分钟，上清即为抗原。
在制备血清前，应检查每型抗原的型特异性，即用同型及异型的标准诊断血清(1∶10)与各型抗原(10^-3)用乳鼠作中和试验，各型抗原仅被同型诊断血清中和方为可靠。
将20%乳鼠肌肉悬液抗原加1毫升佐剂 （成分同前）混合后，免疫豚鼠或地鼠制成免疫血清，免疫血清经无菌试验、物理检查、效价测定、交叉中和试验、毒性试验等项检查，测定效价，特异性试验及毒性检定均用乳鼠进行。检定合格的血清按需要量配制成组合血清或按1毫升分装于安瓿，在-20℃低温冰箱保存，或冷冻干燥后于4℃保存。用前血清在56℃经30分钟灭活。
诊断血清的应用
(1)单价血清： 根据各型诊断血清的中和效价，按40个中和单位稀释后使用。为方便起见，一般效价在1∶5,000～10,000或以上者作1∶100稀释，效价在1∶2,000～5,000以下者作1∶50稀释，效价在1∶2000以下者作1∶30稀释。
(2)组合血清：根据Lim等原理，将现有型别的肠道病毒单价诊断血清（脊髓灰质炎病毒除外），分别配制成A-H 8个组合血清组及J-P₇个组合血清组。在各组中每型血清均含有40个中和单位。使用组合血清之前不必再作稀释。A-H及J-P组合血清的配制和定型结果判定见上表。
用组合血清鉴定病毒很简便，A-H组包括39个血清型，鉴定某一未知病毒用A-H8种血清即可，如该病毒可被A组及B组中和则该病毒为柯萨奇A₇型。