红细胞谷胱甘肽测定

成熟红细胞中所含的谷胱甘肽大部分为还原型谷胱甘肽(GSH)，是一种含硫氢基的三肽，此种物质具有活跃的生化特征，红细胞中GSH通过血红蛋白的硫氢基的还原，防止膜蛋白和某些酶氧化，因而对保持红细胞的完整性和正常代谢十分重要。当GSH减少时，红细胞中高铁血红蛋白不能被还原，形成变性珠蛋白小体或称Heinz小体，同时红细胞膜的脂类和多种酶的活性均受到干扰，使红细胞膜破坏，造成溶血。
测定红细胞中GSH含量，近来常用的是5,5-dithio-bis-2-nitrobenzoic acid (DTNB)法，其反应原理如下：

测定方法： 全血0.2ml加入蒸馏水1.8ml与偏磷酸液3ml，混合，5min后用滤纸过滤。滤液2ml中加0.3MNa₂HPO₄ 8ml，并准确加入DTNB 1ml，混合。5min内以412nm波长测读光密度。测全血中的GSH含量GSH存在于红细胞中，因此，红细胞比积对结果有直接影响。故每dl红细胞中的GSH含量(mg)=310.4×
本法正常值为46～100(平均73.2)mg/dl红细胞。由于正常组低值与异常组有重叠，通常同时作谷胱甘肽稳定试验以进一步补充和证实。此试验的原理是当葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽合成酶、谷胱甘肽过氧化物酶缺乏时，GSH含量减低。还原型辅酶Ⅱ生成不足，使氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原为GSH减少，红细胞稳定性下降。此时，红细胞不经温育，GSH仅较正常者略下降。若加入乙酰苯肼温育2h后，GSH即明显减少，正常人红细胞加入乙酰苯肼并温育，GSH的含量很少受影响。测定方法是将肝素抗凝血置试管中振荡30min，此血在3h内使用，取血按上法测定GSH含量，另取血1ml放入含有5mg乙酰苯肼的试管中，用玻棒搅动，待乙酰苯肼溶解，并振荡，使红细胞与O₂充分作用后，置37℃温育2h，其间混合振荡一次。再按上法同样测定GSH。对比温育前后的GSH含量。正常人加乙酰苯肼温育2h后GSH含量下降不超过20%。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的患者明显下降，杂合子可降至50%左右，纯合子则更低，甚至测不出。