红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定

红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)是参与磷酸戊糖旁路代谢中的一种重要酶。当G6PD缺乏时，使葡萄糖在该旁路代谢中受到影响，从而使还原型辅酶II产生不足，故谷胱甘肽还原减少，影响红细胞的代谢和功能，而导致溶血。以G6PD缺乏引起的溶血性贫血较多见，故测定G6PD活性对溶血性疾病的鉴别很有帮助。G6PD的检测方法较多，一般实验室常用高铁血红蛋白还原试验、红细胞G6PD玻片洗脱或荧光法等。这些方法简单易行，适合筛选，可间接反映G6PD活性，但可出现假阳性。直接检测G6PD活性是采用G6PD在酶促反应单位时间内生成还原型辅酶II的量来反映G6PD活性。还原型辅酶II在340nm波长处有一吸收峰，可用紫外分光光度计测读。G6PD活性用经0.154M氯化钾充分洗涤过的红细胞制备血红蛋白溶液，将此溶液加入含有辅酶II、G6P-Na₂和MgCl₂的测定杯中，摇匀、计算时间，每分钟读光密度一次，共计六次。求出每分钟光密度变化的平均值。对照杯只加血红蛋白溶液，不加辅酶II和G6P-Na₂。在340nm波长调节零点。然后再取血红蛋白溶液与氰化高铁血红蛋白试剂作用，在540nm波长下测读光密度，测定血红蛋白浓度，按下式计算： G6PD活性(光密度/min/gHb25℃)=测定管每分钟光密度变化的平均值/血红蛋白浓度的光密度×83.1×tK（温度校正常数）。G6PD活性按每克血红蛋白所含单位表示。正常值为4～7u/g。本试验需预先制备新鲜的血红蛋白溶液，分离和洗涤红细胞应在冷的条件下进行。G6PD缺乏时酶活性降低，这是一种先天性遗传性疾病，常可引起溶血。这种病人在摄入某些氧化剂药物如伯氨喹啉、某些磺胺药物、新鲜蚕豆或细菌感染等可发生溶血危象。