系测定人体对某种药物病原体或其代谢产物反应性的一种方法。多用于判定能否应用某种药或是否感染有某种疾病的重要参考依据。方法是采用皮肤细腻、血管清晰、皮肤较洁白的前臂腕上掌侧部位,注入一定量的待观察物质,经过一定时间后观其局部与全身反应。一般局部阳性反应有发红、水肿、硬结、变色、水疱等。常用的试验有青霉素、链霉素、血清、普鲁卡因等药物试验及血吸虫、肺吸虫病调查与结核菌素试验等。
皮肤试验
皮肤试验(皮试)是借助皮肤测定机体的特异性或非特异性反应进行疾病诊断或指导防治的方法。属于体内的生物学测定范畴,更接近受试者的个体条件,其特异性、灵敏度和重复性均较满意,且方法简便,至今为临床广泛应用。可分为特异性和非特异性两类。
特异性皮试 是指针对机体内某一特殊抗体或致敏淋巴细胞的皮试。按其反应性质不同又分为:
❶变态反应性皮试:即利用抗原(抗体)或致敏淋巴细胞在皮肤产生的变态反应来推断机体的免疫状态。包括各种致敏原的皮肤贴斑、抓伤、点刺、皮内注射等。致敏淋巴细胞的变态反应性皮试则包括结核菌素试验。
❷中和反应性皮试:利用抗原(抗体)在皮内的中和反应来推断患者体内是否存在某种特异性抗体(抗原)的试验,如测定猩红热免疫力的Dick试验、测定白喉免疫力的Schick试验等。此外,还有被动转移皮试和被动过敏试验,前者是将过敏患者血清被动转移到正常人体皮内,然后用特异性抗原注入血清转移部位,以测定机体的致敏性;后者则是利用致敏动物的抗体经皮内注入正常动物,然后再经静脉同时注入抗原与染料,观察抗体注入局部皮肤是否显色以测定机体的致敏性。
非特异性皮试 是指不针对某一特定抗体的皮肤反应性测定。如测定皮肤对压力敏感性的皮肤划痕试验; 测定皮肤对温度刺激的皮肤贴冰试验; 测定皮肤对紫外线或γ射线敏感性的皮肤试验等。还有利用植物血凝集素、二硝基氯苯、二硝基氟苯等药物进行皮肤表面涂抹以及皮内注射斑蝥素进行机体非特异性免疫功能的试验亦属此范畴。皮肤试验有以下几种。
❶斑贴皮试: 将一定量(或浓度)的固态或液态抗原物质,贴敷于前臂腹面皮肤上,然后用玻璃纸覆盖,纱布固封。24h(必要时可延至48~72h后揭去敷贴物,观察皮肤反应。适用于接触性过敏或有高度过敏性药物的检查;
❷抓伤皮试:在前臂皮肤腹面滴一滴抗原溶液,然后在表皮划成0.5cm长短的十字,不伤真皮,10~20min内观察皮肤反应;
❸点刺皮试: 和上法相似,改划痕为针刺;
❹皮内试验: 将一定浓度的抗原液0.01~0.02ml注入上臂、前臂或背部皮内,使之形成0.3~0.4cm直径的皮丘,20~30min观察Ⅰ型 (速发型)变态反应,48~72h观察Ⅳ型 (迟发型)变态反应。阳性者皮丘明显增大,周围皮肤充血,皮丘可出现伪足,瘙痒;严重的速发变态反应可见周身皮肤潮红,皮疹,瘙痒,咳嗽,喷嚏,哮喘,甚或休克;
❺皮肤窗试验:在前臂皮肤腹面刮去0.5cm2一小片表层上皮,不使出血,滴一滴液态抗原或贴上少量固态抗原,在皮窗上覆上一片2.2cm2的盖玻片,纱布固封。24h后观察皮肤反应,将盖玻片固定、染色,镜下检查嗜酸粒细胞。阳性反应时则皮肤红肿发痒,皮窗渗出物多,盖玻片上可查到大量嗜酸粒细胞;
❻离子透入皮试:用一定浓度的抗原液浸润电极,用离子导入器经病人前臂或背部皮肤导入抗原离子。每次导电时间及电流量按导入物的电离度进行调整,导入10~20min后观察皮肤反应。阳性者可在皮肤局部出现红、肿、丘疹、疱疹、溃疡或渗出等。离子导入前应了解导入物的极性和离子的电荷性,始可决定经阴极或阳极导入。此法较繁杂,目前较少应用。现将上述诸法的优缺点列于下表。
几种皮试优缺点的比较表
| 斑贴 | 抓伤 | 点刺 | 皮内 | 皮窗 | 离子导入 |
安全性 | +++ | ++ | ++ | ++ | ++ | ++ |
可靠性 | + | + | ++ | +++ | ++ | ++ |
简便性 | +++ | ++ | ++ | ++ | + | + |
观察时间 | 长 | 短 | 短 | 短 | 长 | 短 |
适应证 | 接触 性过敏 及高度 敏感者 | 吸入, 食入及 接触性 过敏 | 吸入, 食入及 接触性 过敏 | 吸入, 食入及 注入性 过敏 | 吸入, 食入及 接触性 过敏 | 吸入,食 入及接触 性过敏 |
一次同时能 做试验数 | 10种 以下 | 10种 以下 | 数十 种 | 数十 种 | 1~2 种 | 1种 |
影响皮试的因素和注意点 ❶年龄: 初生婴儿由于免疫功能尚未充分建立,老年人则由于免疫功能减退均可影响测试的敏感性;
❷皮肤激惹性各有差异,如皮肤划痕症病人皮肤激惹阈很低,易对某些皮肤反应产生假阳性反应;
❸皮肤的吸收能力因皮试方法不同而异。斑贴试验皮肤吸收率最低,反应轻微; 抓伤或点刺试验则吸收较高,反应亦重;皮内试验则吸收完全,且可定量,应用最为广泛。不同部位的皮肤吸收能力也有差异;
❹试剂用量和浓度与皮肤试验反应的强弱密切相关,量不足可致假阴性反应,反之易形成假阳性;
❺受试者肤色有时可影响反应的观察;
❻其他药物的影响,如皮试前24~48h内曾用抗组胺药物、拟交感神经药、肾上腺皮质激素、肥大细胞保护剂、黄酮类药物、阿托品类药物等可在不同程度上影响皮试结果。其中以前两类药物影响较为明显。
皮肤试验虽然简便实用,但对某些高度敏感的病人仍可诱发剧烈反应,如青霉素皮肤试验可导致过敏休克,甚至死亡。故在进行试验时,宜注意以下问题:
❶皮试时应备有急救设备,防止意外;
❷有强烈过敏史者,皮肤应先从斑贴试验开始,逐步过渡到皮内试验;
❸有泛发性皮肤病者不宜进行皮肤试验; 有皮肤划痕症者应参照空白对照试验下进行皮试;
❹严格掌握试液用量、浓度和操作方法,观察反应时应认真仔细,防止可能出现的假阳性或假阴性。
皮肤试验
通过皮肤试验,可以了解被试者对某些传染病的免疫状况以及对某些物质(如药物等)是否过敏。儿科常用的皮肤试验有:
(1) 结核菌素试验(O. T. 试验)或称Mantoux试验:感染结核病或接种卡介苗后,经过3~8周(通常5~6周)潜伏期,机体产生对结核菌的变态反应,可用旧结核菌素(O.T.)即结核菌的全提出物作为抗原(也可用纯蛋白衍生物即PPD作抗原)作皮肤试验以反映此类迟发型变态反应。
取所需浓度的旧结核菌素0.1ml于前臂掌侧中、下1/3交界处作皮内试验,72小时观察反应(48小时以内的反应可能为假阳性)。通常用1:1000稀释度,即0.1ml含O.T. 0.1mg或10单位;或用1:2000。如有明显结核接触史或可疑结核病患者则选用1:10,000,如阴性再作1:1000观察结果。如再阴性,为否定结核可作1:100。注射部位有红肿硬块,其直径小于5mm为 “—”,5~10mm为“+”, 11~20mm为(⧺), 20mm以上为(⧻),伴有坏死或水泡者为(
)。如用1:100作试验时(+)无意义。局部仅有红晕而无硬块者,不论直径大小均作阴性论。阴性结果提示:
❶未受结核杆菌感染 (如能排除下述其他导致阴性结果的原因,1/100阴性时可否定结核病诊断);
❷处于结核感染后1个月之内 (变态反应前期);
❸O. T.试液过期或储藏不当而失效(平时宜贮于冰箱中,稀释后宜于二周内使用),或操作错误;
❹严重结核病如粟粒性结核、结核性脑膜炎后期;
❺因某些原因使免疫力低下如患麻疹后,应用免疫抑制药物后,或极度衰弱、严重营养不良时。 阳性结果提示:
❶已有过结核感染,3岁以内婴幼儿如未接种过卡介苗(结核菌苗)者表示有活动性原发性结核。年龄越小,诊断意义越大。强阳性者结核活动的可能性大。
❷接种卡介苗后,但一般为弱阳性, 不超过(⧺), 接种时间越长, 阳性率越低。
(2) 青霉素皮内试验: 为测定对青霉素过敏的一种方法。凡7天(小儿3天)内未用过青霉素的各种制剂,在使用前均需作皮肤试验。有青霉素过敏史者忌用青霉素,并禁忌作本试验。取每毫升内含100单位的青霉素G溶液,于前臂掌侧中、下1/3交界处皮内注射0.1ml(10单位),20分钟后观察皮肤反应,如有直径超过1cm的硬块或红晕或有伪足、痒感,或局部并有小水泡者均为阳性反应。少数高度过敏者,皮试时也会发生胸闷、气急、面色苍白、出冷汗,甚至休克等过敏反应,应立即让病儿平卧,肌注肾上腺素(0.01mg/kg)。近年国内某些地区采用青霉素G离子透入法进行皮肤试验,其优点需时较短,可同时进行对照试验,可避免注射操作。
(3) 白喉毒素试验(Schick试验): 以0.1ml含1/50最小致死量的白喉毒素于前臂掌侧中、下1/3交界处作皮内试验,同时以同量加热的毒素作对照。48~72小时后观察反应。出现直径大于1cm的红晕,水肿和浸润块为阳性; 4~7天内局部皮肤转棕褐色并皱缩变硬,示受试者对白喉易感,对照处无反应。阴性为对白喉有免疫力,36小时内出现红晕可能为假阳性。7岁以上儿童白喉预防注射前可先作本试验,阴性者不必接种。本试验尚有指导白喉诊断及治疗的意义,并可作为测定人体体液免疫(IgG产生)功能指标之一。
(4) 白喉抗毒素试验: 以生理盐水将抗毒血清 (马血清)稀释10倍(0.1ml血清加0.9ml生理盐水);注射0.1ml稀释液于病人前臂内侧中部皮内,观察15分钟,如注射部位无反应为阴性,表示机体对抗毒血清无过敏现象,如有红肿则应采用脱敏法后才可注射抗毒血清治疗或可用中药治疗(见“白喉”条,138页)。破伤风抗毒素皮试的方法及临床意义和本试验相同。
(5) 白喉类毒素试验(Moloney试验):取0.1ml1∶100稀释的白喉类毒素液作皮内试验以测定对类毒素成分的过敏反应,24小时后局部有红肿为阳性,但此法可靠性差,实用价值不大,且要求制剂高度提纯以减少过敏反应。
(6) 红疹毒素试验(Dick试验):以0.1ml链球菌红疹毒素(相当于1个皮试单位)作皮内注射,18~24小时内注射处出现红肿直径大于1cm者为阳性,提示对链球菌红疹毒素(外毒素)无免疫力,即为猩红热易感者; 阴性者提示有免疫力、不易感染猩红热,或虽有链球菌感染而无猩红热样皮疹。猩红热患者发病初几天内可阳性,恢复期转为阴性。有人用酒精沉淀红疹毒素可得不耐热的毒素,临床意义更可靠。
(7) 链球菌激酶-链球菌去氧醋粟糖核酸酶 (SK-SD)皮肤试验: 取SK-SD溶液(SK40u/ml,SDlu/ml)0.1ml作皮内试验,24、48小时分别观察反应,如局部有红肿者为阳性,此反应属迟发型变态反应。阳性提示过去有过链球菌感染,同时也反映机体细胞免疫功能健全;阴性提示过去未曾有过链球菌感染(极为少见),或提示免疫缺陷。如反应发生早至6~8小时则不属迟发型变态反应,而为局部抗原-抗体样反应。
其他抗原如白色念珠菌皮肤过敏素 (DermatophytinO),流行性腮腺炎病毒抗原等也可被用作皮肤试验以测定人体的迟发型变态反应。许多寄生虫病诊断所用的皮内试验,多数也利用此原理。